[发明专利]一种以叶片为外植体建立彩红杨再生体系的方法

说明书

本发明属于组织培养繁殖领域，公开了一种以叶片为外植体建立彩红杨再生体系的方法，包括以下步骤：首先进行外植体选择，然后用0.1%HgCl₂消毒12min，接种于诱导培养基中进行不定芽诱导，控制培养温度在24‑26℃，然后在光照时间10‑14h/天、光照强度为1400‑1800lx下培养25天，接着将所得彩红杨不定芽的幼苗切割转入继代培养基中进行培养，最后将彩红杨无菌苗接入生根培养基中进行生根培养25天。通过该方法能够有效的解决彩红杨离体快速繁殖的问题。

技术领域

本发明涉及彩红杨组织培养繁殖方法，具体涉及一种以叶片为外植体建立彩红杨再生体系的方法，属于木本观赏植物种苗繁殖的技术领域。

背景技术

彩红杨，为杨柳科杨属，是美洲黒杨2025杨的基因诱导芽变新品种。其全年生长期枝条叶片颜色，从上到下分别呈现鲜红——浅黄——橘黄——黄绿色。目前，该品种主要采用扦插和嫁接两种方式进行植株繁育。扦插育苗过程中种条的剪取、插穗的制备、扦插时间、扦插密度及苗期管理技术所需的注意事项同其他杨树品种基本一样。嫁接育苗时，砧木的选择非常重要。嫁接繁殖时黑杨派系成活率最高，生长最好，青杨派次之，欧美杨成活率较低，白杨和小叶杨不宜作嫁接砧木。嫁接苗苗期管理技术同其他杨树基本一样。砧木嫁接和穗材扦插以春季最好。

该品种具有较强的抗病虫害能力，抗旱能力，可广泛应用于园林、郊区、道路、旅游景点、新农村绿化建设。目前该品种种苗数量在国内非常少，经过调研发现，扦插苗和嫁接苗无法供应市场需求，因此彩红杨资源紧缺，其应用受到了限制。

有关彩红杨的组织培养，国内外鲜有报道。初代无菌系建立非常困难，高分化率低污染率的彩红杨再生体系方法尚未建立。

综上所述，采取组织培养繁殖彩红杨是解决其资源短缺的重要途径之一，且对彩红杨的开发和推广利用都有着非常重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术存在的缺陷，本发明提供了以叶片为外植体建立彩红杨再生体系的方法。

为解决该技术采用如下的技术方案：

一种以叶片为外植体建立彩红杨再生体系的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：A）外植体选择与消毒，B）不定芽的诱导，C）继代培养与增殖，D）根的诱导。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

A）外植体选择与消毒：选取外植体，洗涤剂振荡10分钟，流水冲洗30分钟后，于无菌操作台上用75%乙醇消毒1min，再用0.1%的升汞消毒12min，最后用无菌水洗涤6次；

B）不定芽的诱导：取消毒后的叶片外植体切去边缘，保留面积约3cm²，将外植体接种于诱导培养基中进行不定芽诱导，控制培养温度在24-26℃，红光照射培养1天；然后继续培养24天，光照时间10-14h/天，光照强度为1400-1800lx；

C）继代培养与增殖：将步骤B）中所得彩红杨幼苗切割后接入继代培养基中进行继代培养30天，培养温度24-26℃，光照时间10-14h/天，光照强度为1400-1800lx；

D）根的诱导：将步骤C）所得彩红杨试管苗接入生根培养基中进行生根培养25天，培养温度24-26℃，光照时间10-14h/天，光照强度为1400-1800lx。

优选地，

步骤A）中的外植体选取彩红杨表面积约5cm²的幼嫩叶片。

优选地，

步骤B）中采用的诱导培养基为：MS+6-BA 1mg/L +NAA0.2 mg/L。

优选地，

步骤C）中采用的继代培养基为：MS+6-BA 1mg/L +NAA0.2 mg/L。