[发明专利]一种多抗原蛋白组合应用于肺结核的鉴别与诊断

说明书

本发明涉及5个抗原蛋白应用于活动性结核病的鉴别与诊断，并提供一种诊断试剂，本发明特别涉及一种新的结核病诊断方法，即采用5个抗原蛋白P22352，Q9P121，P15151，Q13291，Q8NDA2作为生物标志物，检测尿液中5个抗原蛋白的含量，并以特定的含量的量值作为诊断指标，在该正常值范围内则为阴性。任意3个或以上抗原蛋白的浓度超过或低于该正常值范围，判断为阳性结果。

技术领域

本发明涉及一种诊断试剂，特别涉及一种多抗原蛋白应用于活动性结核病的鉴别与诊断。

背景技术

结核病是危害人类健康的主要传染病之一，是当今世界上成年人传染病中的主要杀手，已对国际公共卫生构成严峻挑战。我国是全球结核病高负担国家之一，结核病疫情呈“三高一低”，即患病率高、死亡率高、耐药率高、年递降率低，随着艾滋病合并感染、耐药结核以及流动人口增多等情况的出现，防控形势非常严峻。自结核分枝杆菌发现以来，由于菌体的细胞壁较厚、脂肪酸含量较高、胞内寄生等特点，结核病的早期和快速诊断一直以来灵敏度较低，没有突破性的进展。目前多种诊断手段的联合应用(痰涂片、痰培养和分子诊断技术)仅仅可以诊断出50％左右的结核病患者，仍然有近一半的临床病原学阴性或者痰菌阴性的结核病人无法得到科学、合理和快速的诊断，甚至贻误病情、导致耐药。因此，快速准确诊断出结核病人群，以便后续采取有效的治疗干预措施，降低感染者的发病风险，将是降低结核病发病率的最直接手段。

鉴于很多疾病都在尿液的化学代谢物中有所反映，在尿液中找出疾病的一种或多种特异性的生物标识物，将有助于研究人员利用少量尿液或甚至一滴尿液检测许多疾病。尿液具有收集简单、取材方便、来源丰富、非侵入性等特点，尿液蛋白的种类和数量的变化携带有许多疾病的发生、发展及预后的各种信息，因此在疾病的诊断、监测、预后等方面很有价值，有广阔的应用前景。传统的痰涂片检查虽然是诊断肺结核的金标准，简便易行，结果可信度也较高，但阳性率较低，临床上仅有约20-30％的肺结核患者痰涂片检测阳性。采用痰中分枝杆菌培养的方法，耗时较长，经常需要1-3周甚至4-6周，不能满足快速诊断的需要。目前采用的分子诊断技术，例如GeneXpert MTB/RIF方法，虽然灵敏度较高，常可以在较短时间内(约2小时)直接从病人新鲜痰液或冻存痰液中检测是否存在结核分枝杆菌及对利福平的耐药性，但整个过程需要在密闭环境中进行，需要专业的 GeneXpert检测仪器和标本收集盒，并且需要专业人员来操作，成本高昂，不利于大规模地推广。即便目前多种病原学诊断联合应用(痰涂片、痰培养和分子诊断技术)，也仅仅只能诊断出50％左右的结核病患者，仍然有近一半的临床病原学阴性或者痰菌阴性的结核病人无法得到科学、合理和快速的诊断。近年来以细胞免疫反应为基础的血液中γ干扰素释放试验，如T-SPOT和QuantiFERON-TB Gold检测获得了较快的发展被并广泛应用，但其诊断的敏感性也有待提高，经常会出现无法判定检测结果的情况，而且无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染，并且其成本较为高昂、具有侵入创伤性。因此，在目前的情况下，急需开发适合我国国情的具有自主知识产权、成本低廉、简便快捷的无创诊断产品。

本发明在现有技术的基础上，采用生物标志物方法，意外发现新的生物标志物，即5个抗原蛋白(P 22352,Q9P121,P15151,Q13291和Q8NDA2)，本发明发现通过检测这5个抗原蛋白中的任意3个或以上的组合的含量，可以诊断肺结核且能达到82.7％的诊断灵敏度，能很好地区分结核病人和潜伏感染人群。为此，本发明提供一种新的结核病诊断方法，即采用5个抗原蛋白及其组合作为生物标志物，检测尿液中5个抗原蛋白的含量，并以特定的含量的量值作为诊断指标， 5个蛋白中任意3个或以上抗原蛋白的浓度低于或超过该限度，判断为阳性结果。

发明内容

本发明的目的在于提供5个抗原组合在诊断结核病中的应用。本发明所述的抗原组合能够作为诊断结核病或者检测结核分枝杆菌潜伏感染的诊断标识，并且其具有良好的敏感性和特异性。

本发明所述的五个抗原蛋白皆为人体尿液中的蛋白，分别名称为：P22352，Q9P121，P15151，Q13291，Q8NDA2。