[发明专利]一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法

说明书

本发明涉及利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法，可有效解决用荧光显微镜清晰观察到植物下表皮毛被的类型及分布，保证药材品质的问题，方法是，从植株上剪下成熟的叶片，在叶片中脉中段两侧剪取无粗叶脉的5‑10mm²叶片，将剪取的叶片置于甲醇中，用乙醇除去叶绿素，小檗碱中浸泡，再用香草醛‑浓盐酸液处理，漂洗，封片，用落射荧光显微镜观察腺毛和非腺毛的类型和分布，并摄像。本发明操作简单，成本低，工作量小，成功率高，观察清晰，效果好，可以圆满解决多种叶表皮密被非腺毛和腺毛的植物的观察，对操作技术要求不好，即可到达理想的效果，是植物结构观察上的创新，具有很强的实用性，经济和社会效益显著。

技术领域

本发明涉及显微观察植物领域，特别是利用徒手切片技术对植物进行切片和染色处理的一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法。

背景技术

植物分类研究中，毛被特征是植物叶表皮研究中一个非常重要的方面。毛被类型分为腺毛和非腺毛大类。一般认为，腺毛具有分泌作用，非腺毛只具有保护作用。对于许多药用植物来说，叶表皮毛被的生长发育状态可以直接影响药材的品质。因此，在植物学研究中，经常需要观察毛被的类型和分布。然而，在对于如艾、野菊等菊科的多种植物，在叶下的表皮上密被有大量被称为“绵毛”的非腺毛，一方面由于“绵毛”的数量和密度难以观察，另一方面由于厚重“绵毛”的覆盖，分布于“绵毛”下的腺毛的类型和分布特征也无法看到，无论是普通的亮视野光学显微镜还是扫描电子显微镜都难以解决。那么如何观察到到这类植物叶下表皮的毛被类型及其分布，是需要认真解决的技术问题。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法，可有效解决用荧光显微镜清晰观察到植物下表皮毛被的类型及分布，保证药材品质的问题。

本发明解决的技术方案是，一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法，包括以下步骤：

（1）、剪取叶片：从植株上剪下成熟的叶片，在叶片中脉中段两侧剪取无粗叶脉的5-10mm²叶片；

（2）、甲醇固定：将剪取的叶片，置于甲醇中固定3—6h；

（3）、乙醇处理：将叶片转移至体积浓度95%的乙醇中浸泡6—12h，以除去叶绿素；

（4）、小檗碱处理：从体积浓度95%的乙醇中取出处理好的叶片，在体积浓度0.1%—0.5%的小檗碱中浸泡5—15min；

（5）、香草醛-浓盐酸处理：将叶片从小檗碱中取出，转移至香草醛-浓盐酸液中处理1—5min；所述的香草醛-浓盐酸液是，香草醛1-5g加浓盐酸至100mL制成，浓盐酸质量浓度为36%—38%；

（6）、漂洗：将叶片从香草醛-浓盐酸液中取出，用水漂洗1—2min；

（7）、封片：将漂洗好的叶片转移至载玻片上，盖上盖玻片，轻轻压平，用落射荧光显微镜观察腺毛和非腺毛的类型和分布，并摄像。

本发明操作简单，成本低，工作量小，成功率高，观察清晰，效果好，可以圆满解决多种叶表皮密被非腺毛和腺毛的植物的观察，对操作技术要求不好，即可到达理想的效果，是植物结构观察上的创新，具有很强的实用性，经济和社会效益显著。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中可由以下实施例给出。

实施例1

本发明一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法，包括以下步骤：

（1）、剪取叶片：从植株上剪下成熟的叶片，在叶片中脉中段两侧剪取无粗叶脉的8mm²叶片；