[发明专利]用于羽衣甘蓝和芥蓝花期鉴定的分子标记引物及应用

说明书

本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，更用于羽衣甘蓝和芥蓝花期鉴定的分子标记引物及应用，所述的分子标记的引物为：TXC100F:CAGTGTCTCTACGGGTCTTCGAG、TCX44F:GGACAAGACAGCCACGTGTA和TCX36R:CAGTCTCGCTGCTCTCGCGG。利用本发明提供的引物对芥蓝、羽衣甘蓝及二者的杂交后代DNA进行扩增，晚花群体可特异性的扩增出2625bp的条带或2625bp和1358bp的双条带，早花群体仅可特异性的扩增出1358bp的条带；根据条带的大小的不同，可对两亲本及二者杂交的后代花期进行区分，该标记与甘蓝花期性状共分离，可以在甘蓝花期选择方面进行应用。

技术领域

本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，更具体涉及用于羽衣甘蓝和芥蓝花期鉴定的分子标记引物及应用。

背景技术

芥蓝(Brassica oleracea var.alboglabra)为十字花科芸苔属作物，是甘蓝类的一种变种蔬菜，其食用器官为肥嫩的花薹和幼嫩的叶片，其口感清香，质地脆嫩，营养价值丰富，富含蛋白质、维生素C、矿物质、粗纤维和类胡萝卜素等，风味别致，深受广大消费者的喜爱。春化作用是指有些植物需要经历一段时间的持续低温才能由营养生长转化为生殖生长。芥蓝不需要春化，与芥蓝相近的结球甘蓝(B.oleracea)和甘蓝的另一变种羽衣甘蓝(B.olerac ea var.acephala)则为绿体春化植物。

2014年已经完成了结球甘蓝和野生甘蓝的基因组测序工作。2018年苏等人对青花菜(b roccoli)×结球甘蓝群体进行研究，定位控制青花菜早花基因为2号染色体的2.653Mb–2. 881Mb之间，2018年研究认为基因Bol024659与拟南芥花期主效基因GRF6同源，推测该基因为青花菜与结球甘蓝花期差异控制基因。

申请人发明与甘蓝花期共分离的标记，该标记可用于检测甘蓝的花期。因此，该标记的发明对甘蓝类蔬菜的辅助育种有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于利用分子标记技术，提供一种用于羽衣甘蓝和芥蓝花期鉴定的分子标记引物，所述的分子标记的引物为：TXC100F:CAGTGTCTCTACGGGTCTTCGAG、TCX44 F:GGACAAGACAGCCACGTGTA和TCX36R:CAGTCTCGCTGCTCTCGCGG。

本发明的另一个目的在于提供上述分子标记引物在甘蓝类蔬菜育种中的应用，特别是羽衣甘蓝或芥蓝，或其杂交品种的花期育种中的应用。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

申请人利用芥蓝与羽衣甘蓝进行杂交，获得F_2:3及F_3:4分离群体，利用BSR-seq数据，在网站primer3.0(http://primer3.ut.ee/)上设计CAPS分子标记，将甘蓝花期控制基因精细定位于2号染色体2.036Mb-2.117Mb约80kb范围内。利用甘蓝基因组The B.olereacevar.o lereace“TO1000”(http://plants.ensembl.org/Brassica_oleracea/Info/Index)设计特异性引物，利用设计合成的引物，对芥蓝与羽衣甘蓝及二者杂交后代DNA进行PCR扩增，筛选得到分子标记TCX100F、TCX44F和TCX36R，针对其设计的引物为TXC100F:CAGTGTCTCTAC GGGTCTTCGAG、TCX44F:GGACAAGACAGCCACGTGTA和TCX36R:CAGTCTCGCTGCTCTCGCGG。