[发明专利]一种甲钴胺颗粒有关物质的测定方法

权利要求书

1.一种甲钴胺颗粒有关物质的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取适量甲钴胺颗粒置于量瓶中，加入流动相A振摇使其溶解、稀释，制成浓度为0.1mg/ml的溶液；摇匀、离心，取上清液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取适量甲钴胺和羟钴胺对照品，加流动相A超声使其溶解，稀释，制成浓度为1ug/ml的对照品溶液；

(3)灵敏度溶液的制备：取适量对照品溶液置于量瓶中，加流动相A稀释，制成浓度为0.05ug/ml的灵敏度溶液；

(4)采用高效液相色谱测定有关物质的含量，具体为：

将步骤(3)制得的灵敏度溶液注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，再精密量取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(4)中色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相包括流动相A和流动相B，流动相A由磷酸盐缓冲液和乙腈组成，流动相B由乙腈和水组成；检测波长为300-360nm，进样量为100μl，柱温为40℃，流速为0.5-1.5ml/min；以及采用梯度洗脱。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，检测波长为342nm，流速为1.0ml/min。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.05mol/L，PH值为3.5-5.0。

5.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.03mol/L，PH值为4.5。

6.根据权利要求4或5所述的测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢胺、磷酸氢二胺中的一种或几种。

7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钾。

8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，流动相A由0.03mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比90：10的比例混合而成，流动相B是由乙腈与水按照体积比90：10的比例混合而成。

9.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，梯度洗脱的过程为：于0-6分钟，流动相中A的体积占100％，流动相B的体积占0；于6-30分钟，流动相中A的体积从100％变化为92％，流动相B的体积从0变化为8％；于30-40分钟，流动相中A的体积从92％变化为100％，流动相B的体积从8％变化为0％。