[发明专利]低痛神经生长因子突变体

说明书

本发明涉及低痛神经生长因子突变体，属于生物制药领域。低痛神经生长因子突变体，为序列表SEQ ID No：3至SEQ ID No：49中任意一个氨基酸序列。本发明的优点在于：神经生长因子突变体具有低疼痛性，可减轻疼痛副作用。

本申请为申请号为201710225746.6、发明名称为“低痛神经生长因子突变体”专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及低痛神经生长因子突变体，属于生物制药领域。

背景技术

疼痛根据其神经生理学机制可分为感受性疼痛和神经病理性疼痛两类，前者直接由伤害性刺激引起，与组织损伤或炎症反应有关，又称炎症性疼痛；后者由躯体感觉神经系统的损伤或疾病直接造成的慢性疼痛。

神经生长因子(Nerve Growth Factor，NGF)是意大利科学家Levi-Montlcini于1953年在小鼠肉瘤细胞内发现的第一个神经营养因子，NGF是一种具有神经元营养和促进突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。NGF包含α、β、γ三个亚单位，β亚单位是活性区，由两条单链通过非共价键结合而成。Levi-Montalcini因为发现了NGF而获得了诺贝尔奖。目前，国内外已有多个NGF产品上市，临床上主要用于治疗神经系统发育不良，包括弱视、神经瘤、各种神经损伤及神经系统病变等疾病。

NGF存在于多种物种中，在雄性小鼠颌下腺、牛精浆、蛇毒、豚鼠前列腺和人胎盘组织中含量丰富。其中小鼠NGF与人NGF氨基酸序列同源性达到90％。考虑到鼠NGF应用于人体的种属差异性及小鼠作为原材料所具有的潜在的致病因子风险及人胎盘组织原材料的限制，发展基因工程技术制备重组人NGF(rhNGF，recombinant human NGF)来取代提取的鼠NGF和人NGF具有很好的应用前景。

体内成熟的NGF以同源二聚体的形式存在，每条肽链包含120个氨基酸。人NGF基因位于1号染色体短臂上，完整的NGF外显子由241个氨基酸组成，通常称为prepro NGF前体，在内质网中prepro NGF前体的信号肽被切割下来，形成pro NGF前体(223个氨基酸)，proNGF前体在内质网中以同源二聚体形式存在，然后转移至高尔基体中，前体部分经Furin酶切，形成成熟的NGF二聚体(单体含有120个氨基酸)，被转运至细胞外，同时也有部分未经切割的pro NGF前体分泌至细胞外。

重组人源NGF虽然避免了一些潜在的致病风险，但在实际使用过程中仍然会存在很大问题：1)保持NGF生物活性，像其他蛋白质一样，NGF的生物活性依赖于其二级和三级结构，故在制备、纯化、存储及给药期间过程中保持其生物活性特别重要；2)NGF使用过程中会引起较严重的疼痛，部分病人无法耐受，故造成了使用上的部分受限。NGF参与了疼痛的病理生理过程，通过影响炎症介质的释放、离子通道的开放及促进神经纤维的生长导致疼痛，并通过调控离子通道及分子信号从而参与疼痛的发生发展。有学者推测NGF还可能通过促进致痛物质的表达导致疼痛，并在机体损伤后可改变神经元的出芽和再生。目前的研究发现：在人类中，不会引起痛觉过敏的最大剂量为0.03μg/kg(Pettyet al.,1994--29)。但是，如此低的剂量限制了NGF的应用，同时也限制了其适应症的扩大，如用于中枢神经系统。

因此，为避免上述问题，需寻求一种可以减轻疼痛副作用甚至无痛的重组hNGF，从而可加大使用剂量及受试人群，为扩大适应症以及应用于中枢神经系统提供了可能。

发明内容

本发明的目的是提供一组具有低疼痛性甚至无痛的神经生长因子突变体，即重组hNGF。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

低痛神经生长因子突变体，为序列表SEQ ID No：3至SEQ ID No：49中任意一个所示的氨基酸序列。

编码所述的低痛神经生长因子突变体的核苷酸序列。