[发明专利]利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法

权利要求书

1.一种利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将秀丽隐杆线虫同期化处理，具体是将其经裂解、离心、沉淀后培养，即可获得同期化的L4期线虫；

(2)将志贺菌依次在LB固体培养基、LB液体、SK固体培养基上培养，然后烘干形成菌苔；

(3)将步骤(1)已同期化的L4期线虫置于含有志贺菌的SK固体培养基中即可。

2.根据权利要求1所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，所述秀丽隐杆线虫为sek-1，glp-1基因缺陷型秀丽隐杆线虫。

3.根据权利要求1所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，步骤(1)所述裂解时间控制在4min以内，裂解后含虫卵的液体置于20℃、140-160r/min的摇床中震荡20±2h。

4.根据权利要求1所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心转速为1500～3000r/min，离心时间为1～3min。

5.根据权利要求1所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，步骤(1)所述培养是：将离心管底部的L1期线虫转移到洁净的NGM板中，置于20℃生化培养箱中40±2h后即得到同期化的L4期线虫。

6.根据权利要求1所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，步骤(2)中，志贺菌在LB固体培养基中于37℃培养12-16h，再将得到菌落置于LB液体中于37℃摇床中增菌16～18h；将培养的志贺菌菌液完全铺于SK固体培养基上，过夜烘干形成菌苔。

7.根据权利要求1所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，所述的志贺菌为取样病死牛离体的肠道内容物，将所述志贺菌单个菌落进行革兰氏染色，镜检，并接种于麦康凯培养基上，37℃培养16～18h，进一步纯化后接种于LB液体培养基内进行再次培养。

8.根据权利要求7所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，所述的志贺菌的DNA需抽提进行PCR反应，所述的PCR反应引物序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

9.根据权利要求8所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法，其特征在于，所述的PCR反应体系为：2×ES Taq MasterMix 25μL，上下游引物各2μL，模板4μL，ddH2O补足至50μL；反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30S,52℃退火30S，72℃延伸1min，35个循环，72℃终延伸10min。

10.一种利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力方法的应用，其特征在于，利用权利要求1-9任一项所述利用缺陷型秀丽隐杆线虫快速检测牛源志贺菌毒力的方法在药物筛选中的应用，是筛选在缺陷型秀丽隐杆线虫体内对志贺菌有抑制作用的药物。