[发明专利]CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供了CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体。本发明的抗CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体对CD19阳性和/或CD20阳性细胞具有靶向活性，表达抗CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体的T细胞对CD19抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞、CD20抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞均具有杀伤作用，有利于避免免疫逃逸现象，降低了疾病复发的可能性。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

近年来，随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)由肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区以及胞内信号转导区组成。通常，CAR分子包含的抗体单链片段可变区(single chain fragment variable，scFv)对肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)具有特异性结合作用，其通过铰链和跨膜区与信号传导分子的胞质结构域偶联。

目前，CAR-T细胞疗法已经广泛应用于治疗B细胞恶性肿瘤，靶向CD19的CAR-T细胞是CAR-T疗法治疗B细胞恶性肿瘤的先驱，为治疗B细胞恶性肿瘤提供了有效方案。然而，医学诊断表明，很多肿瘤细胞并不表达专一、特异的肿瘤抗原。例如，某些血液肿瘤中的肿瘤细胞并不表达CD19分子，而表达CD20分子，仅利用靶向CD19分子的CAR-T细胞治疗效果不佳，一段时间后部分患者出现了肿瘤复发现象。肿瘤异质性已成为阻碍细胞疗法应用于实体肿瘤治疗的一大障碍。

因此，有必要开发双靶向CD19和CD20分子的嵌合抗原受体，提高CAR-T细胞对肿瘤细胞的靶向和清除作用。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体可以同时靶向CD19和CD20分子，在治疗血液恶性疾病方面具有广阔的前景。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；

所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体。

本发明中，与单靶点嵌合抗原受体相比，抗CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体对CD19阳性和/或CD20阳性细胞具有更强的靶向活性，对CD19抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞、CD20抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞均具有高效的靶向作用，有利于避免免疫逃逸现象。

优选地，所述抗CD19单链抗体包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPPRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSAYTFGQGTKLEIKSGGGGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRHGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLDLQMNSLRVEDTAVYYCARRSITWYGGFDIWGQGTMVTVSSAQTTAPSVYPLAP。

优选地，所述抗CD20单链抗体包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:2：