[发明专利]基于脊椎骨稳定同位素的大洋性鲨鱼生活史研究方法

权利要求书

1.基于脊椎骨稳定同位素的大洋性鲨鱼生活史研究方法，其特征在于，先制备大洋性鲨鱼素材，然后采用如下步骤：

(1)食性转换，稳定同位素信息是捕食者相对较长时期积累的结果，利用稳定同位素信息基于贝叶斯统计方法建立食物混合模型，探索生活史过程中食性的转变；

(2)营养级评估，利用¹⁵N判别值Δ¹⁵N来估算营养级：

TL＝λ+(δ¹⁵N_consumer-δ¹⁵N_base)/Δ¹⁵N

式中：λ是选定的基线生物的营养级，δ¹⁵N_consumer是鲨鱼的δ¹⁵N值，δ¹⁵N_base食物网中基线生物δ¹⁵N值，Δ¹⁵N为判别值；

(3)营养生态位分化，在R语言程序中使用贝叶斯标准椭圆度量营养生态位，以指物种在生物群落或生态系统中的地位和角色；

(4)栖息地利用，脊椎骨轮纹上的稳定同位素比值多为年周期性均值,反映了鲨鱼更长期的摄食信息及不同时期栖息地环境特征,可用以构建鱼类生活史中栖息地变化模式。

2.根据权利要求1所述的基于脊椎骨稳定同位素的大洋性鲨鱼生活史研究方法，其特征在于，所述制备大洋性鲨鱼素材，选用三龄及以上鲨鱼的个体，包括如下步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：切除脊椎骨上肌肉及结缔组织，并用蒸馏水冲洗并烘干；

(3)研磨：在金相研磨机上前后使用120grits、600grits及1200grits防水耐磨砂纸进行研磨，将两面分别打磨至接近中心位置，约成1-3mm厚的脊椎骨薄片，并随时在透射光解剖镜下观察其研磨程度，直至轮纹较为清晰，将样品放至样品盒中待微取样；

(4)微取样：使用装有5mm钻头的微取样仪，在目镜下，从出生纹开始在各不透明轮纹之间打点并连续性微取样，为保证样本量充足，可分别在脊椎骨薄片四边等位置微取样，每个取样点粉末重量应超过0.3mg，将各取样点粉末置于2ml离心管内；

(5)去除无机碳：在离心管中滴加1.5ml乙二胺四乙酸浸泡一周，浸泡完毕后使用超纯水冲洗粉末五遍以去除粉末中残余的乙二胺四乙酸，其中第一遍、第三遍及第五遍使用离心机离心，洗净后置于60℃烘箱内烘干；

(6)包埋：取0.3-1.0mg脊椎骨粉末置于锡舟内，包埋完成后置于样品盒内待测定稳定同位素。

3.根据权利要求2所述的基于脊椎骨稳定同位素的大洋性鲨鱼生活史研究方法，其特征在于，所述三龄及以上鲨鱼采用脊椎骨直径大于10mm的鲨鱼，个体过小的脊椎骨不易研磨，且所携带生活史信息时间短，可用肌肉等其他组织代替。

4.根据权利要求2所述的基于脊椎骨稳定同位素的大洋性鲨鱼生活史研究方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述第一遍、第三遍及第五遍使用的离心机功率为4000转，离心时间为3min。