[发明专利]高产IAA绿色木霉工程菌株及其构建方法与应用

权利要求书

1.含有下述酶编码基因的工程菌；

所述酶编码基因为如下a）-c）中任意一种：

a）色氨酸合成酶编码基因；

b）色氨酸脱羧酶编码基因；

c）色氨酸合成酶编码基因和色氨酸脱羧酶编码基因；

其中，

所述色氨酸合成酶编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述色氨酸脱羧酶编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述工程菌为绿色木霉（Trichoderma viride）。

2.权利要求1所述工程菌的构建方法，其特征在于，包括将重组表达载体转入宿主细胞原生质体中。

3.如权利要求2所述工程菌的构建方法，其特征在于，

所述重组表达载体，其制备方法包括将酶编码基因或其基因表达盒连入质粒；

所述酶编码基因为如下a）-c）中任意一种：

a）色氨酸合成酶编码基因；

b）色氨酸脱羧酶编码基因；

c）色氨酸合成酶编码基因和色氨酸脱羧酶编码基因；

其中，

所述色氨酸合成酶编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述色氨酸脱羧酶编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.如权利要求3所述工程菌的构建方法，其特征在于，基因表达盒的构建中扩增引物包括SEQ ID NO.5-8所示序列，酶切连接位点为EcoRI和KpnI。

5.如权利要求3所述工程菌的构建方法，其特征在于，质粒的构建中采用pBARGPE1-Hygro线性载体，将酶编码基因表达盒连入经EcoRI和KpnI双酶切的pBARGPE1-Hygro线性载体中即得。

6.如权利要求2所述工程菌的构建方法，其特征在于，

所述宿主细胞原生质体为绿色木霉原生质体；

转入方法包括生物学上可接受的直接转化法或者间接转化法。

7.如权利要求6所述工程菌的构建方法，其特征在于，所述直接转化法包括基因枪法、电击法、超声波法、显微注射法和PEG-CaCl₂法。

8.如权利要求6所述工程菌的构建方法，其特征在于，所述间接转化法包括DNA病毒载体介导法和农杆菌介导法。

9.如权利要求6所述工程菌的构建方法，其特征在于，所述绿色木霉为绿色木霉（Trichoderma viride）Tv-1511。

10.权利要求1所述工程菌在如下任意一种或多种中的应用：

c1）提高木霉对不利环境的适应性；

c2）提高木霉的生长性能；

c3）提高木霉产IAA能力；

c4）提高木霉在农业生产中的应用效果；

其中，所述木霉为绿色木霉；

所述c1）应用中，不利环境为盐和高温；

所述c4）应用具体为提高木霉对植物的促生能力，所述植物包括小麦、黄瓜和椒样薄荷。