[发明专利]用于多肽芯片技术平台检测的二抗缓冲封闭液、包括其的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于多肽芯片技术平台检测的二抗缓冲封闭液、包括其的试剂盒及其应用。其中，该二抗缓冲封闭液包括如下组分：130～137mM氯化钠，2.5～2.7mM氯化钾，3.8～4.3mM磷酸氢二钠，1.2～1.4mM磷酸二氢钾，0.05％～1％Tween‑20v/v，0.05％～0.1％Proclin950v/v，0.5％～1％D‑甘露醇w/v和0.1％‑1％酪蛋白酸钠w/v。本发明的缓冲液能够在二抗孵育条件下提供稳定的溶液环境，在不影响多肽‑抗体正常结合的情况下，减少二抗的非特异性吸附，避免对实验结果造成干扰，为后续荧光成像提供真实有效稳定的数据。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于多肽芯片技术平台检测的二抗缓冲封闭液、包括其的试剂盒及其应用。

背景技术

多肽芯片是一种基于衬底材料的芯片，芯片上包括预先设计数量、位置和序列的特征，一个特征是一簇序列相同的多肽，特征与特征之间的多肽序列往往是不一样的，这些特征组成一个高密度多肽阵列。

多肽芯片技术是基于多肽芯片的检测技术，其利用多肽芯片上的种类繁多的多肽与样本的接触，然后利用图像采集技术采集多肽芯片上各个特征信号(具体可表现为携带各个特征信号的荧光图像)，进而输出多肽芯片中每个特征的信号强度，即多肽芯片检测结果数据。具体的，多肽芯片技术往往在样本与多肽芯片接触后，洗去样本中不能与多肽芯片结合或结合力弱的组分，然后使用携带荧光标记的抗体(二抗)标记到特异性目标抗原(样本中的拟观察或检测的特定对象，例如IG G，IG M等)上，进而通过图像采集技术获得多肽芯片上的荧光信号。因此，多肽芯片技术可以鉴定不同个体之间差异表达的抗体，或同一个体在不同时间点差异表达的抗体，进而根据这些信息进一步进行相关的研究。

具体实验中，为保证荧光标记的抗体具有较高的生物活性，获得较好的成像结果，减少荧光标记的抗体的非特异性结合，降低非特异性的背景着色，提高试验的特异性和灵敏度，大都需对荧光标记的抗体进行适当地稀释。稀释后的荧光标记的抗体一般应可以在4℃保存和使用不少于6个月，并可重复多次使用。在ELISA等免疫学实验中，常常会出现高背景值，影响实验结果的检测。这是因为在使用相关免疫学试剂时，蛋白与未吸附的固体载相结合，发生非特异性结合造成的。实际中常通过封闭试剂来封闭这样的固相载体部位，以减少或消除非特异性结合背景的影响。一般封闭试剂中的有效成分有BSA、动物血清、Fab片段单链二抗等。其中，BSA组分相对单一并可能存在牛IgG，因此与能够与抗牛、山羊、绵羊、马等二抗有较强的交叉反应，会造成一定的背景；某些封闭血清内可能会含有叠氮化钠，因此不适用于HRP酶标的检测体系；而Fab片段单链二抗制备复杂，价格高，不宜大量使用，因此，它们均不是多肽芯片平台的通用封闭试剂(封闭液)组分的理想选择。此外，由于多肽芯片上排列了高密度的多肽序列，它们封闭液提出了更高的要求，现有的封闭液进行免疫表针技术的多肽芯片进行实验过程中，存在成本高，封闭效果不稳定的问题。

发明内容

本发明旨在提供一种用于多肽芯片技术平台检测的二抗缓冲封闭液、包括其的试剂盒及其应用，以提供一种适用于多肽芯片技术平台检测的通用封闭液。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种用于多肽芯片技术平台的二抗缓冲封闭液。该二抗缓冲封闭液包括如下组分：130～137mM氯化钠，2.5～2.7mM氯化钾，3.8～4.3mM磷酸氢二钠，1.2～1.4mM磷酸二氢钾，0.05％～1％Tween-20v/v，0.05％～0.1％Proclin950 v/v，0.5％～1％D-甘露醇w/v和0.1％-1％酪蛋白酸钠w/v。

进一步地，二抗缓冲封闭液的pH为7.2～7.6。

进一步地，二抗缓冲封闭液的pH为7.38～7.42。

根据本发明的另一方面，提供了一种用于多肽芯片技术平台检测的试剂盒。该试剂盒包括上述任一种用于多肽芯片技术平台的二抗缓冲封闭液。