[发明专利]N-糖基化修饰之灵芝免疫调节蛋白的应用

权利要求书

1.一种基于N-糖基化修饰之灵芝免疫调节蛋白的制备方法，其特征在于，基于Seq IDNo.17所示的灵芝免疫调节蛋白氨基酸序列，参照Seq ID No.18所示的毕赤酵母(Pichiapastoris)偏爱密码子进行基因合成，通过：

①如Seq ID No.4～7所示的引物获得如Seq ID No.19所示的N-糖基化修饰之灵芝免疫调节蛋白N31S基因；或通过

②如Seq ID No.4、Seq ID No.8、Seq ID No.9、Seq ID No.7所示的引物获得如Seq IDNo.20所示的获得N-糖基化修饰之灵芝免疫调节蛋白T36N基因；或通过

③如Seq ID No.4、Seq ID No.5、Seq ID No.10、Seq ID No.7所示的引物获得如SeqID No.21所示的获得N-糖基化修饰之灵芝免疫调节蛋白N31S/T36N基因；

然后将所述N31S基因、所述T36N基因和所述N31S/T36N基因分别克隆至真核表达载体pPIC9K∷X-His后，分别转化毕赤酵母GS115，获得酵母转化子，最后通过甲醇诱导得到重组蛋白；

所述的N-糖基化修饰之灵芝免疫调节蛋白，来源于毕赤酵母表达系统，其氨基酸序列，如Seq ID No.1、Seq ID No.2、Seq ID No.3所示；

所述的灵芝免疫调节蛋白取自赤灵芝(Ganoderma lucidum)、松杉灵芝(Ganodermatsugae)、紫芝(Ganoderma japoncium)、小孢灵芝(Ganoderma microsporum)、中国紫芝(Ganoderma sinensis)、黑灵芝(Ganoderma atrum)、树舌灵芝(Ganoderma applanatum)或拟鹿角灵芝(Ganoderma amboinense)。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的引物具体为：Seq ID No.4：5’-ccgccgccggaattcatgtctgacaccgctttgatcttc-3’、Seq ID No.5：5’-gaagttagatgggttacctcttccc-3’、Seq ID No.6：5’-gggaagaggtaacccatctaacttcatcgacaccgttaccttcccaaag-3’、Seq ID No.7：5’-atgatgatggggcccgttccattgagcaatgatgaagtcg-3’、Seq ID No.8：5’-gaagttgtttgggttacctcttccc-3’、Seq ID No.9：5’-gggaagaggtaacccaaacaacttcatcgacaacgttaccttcccaaag-3’、Seq ID No.10：5’-gggaagaggtaacccatctaacttcatcgacaacgttaccttcccaaag-3’。

3.一种根据权利要求1或2所述方法制备得到的N-糖基化修饰之灵芝免疫调节蛋白的应用，其特征在于，用于制备抑制细胞中p38 MAPK途径、降低促炎性介质的表达的抗炎性药物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征是，所述的细胞包括小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7。