[发明专利]一种具有亚细胞靶向功能的纳米探针及其应用

权利要求书

1.一种纳米探针，其特征在于，包括：亚细胞靶向探针、纳米颗粒和核酸探针；其中，所述亚细胞靶向探针和所述纳米颗粒之间通过共价偶合的方式连接，所述纳米颗粒和所述核酸探针之间通过共价偶合的方式连接。

2.根据权利要求1所述的纳米探针，其特征在于，所述纳米探针包括：

第一纳米探针，包括：亚细胞靶向探针、纳米颗粒和第一核酸探针；其中，所述亚细胞靶向探针和所述纳米颗粒之间通过共价偶合的方式连接，所述纳米颗粒和所述第一核酸探针之间通过共价偶合的方式连接；

第二纳米探针，包括：亚细胞靶向探针、纳米颗粒和第二核酸探针；其中，所述亚细胞靶向探针和所述纳米颗粒之间通过共价偶合的方式连接，所述纳米颗粒和所述第二核酸探针之间通过共价偶合的方式连接；

其中，所述第一核酸探针和所述第二核酸探针为发夹结构，且两者可以发生链杂交反应。

3.根据权利要求2所述的纳米探针，其特征在于，所述第一核酸探针上修饰第一荧光基团，所述第二核酸探针上修饰第二荧光基团，且所述第一荧光基团和所述第二荧光基团之间可以发生荧光共振能量转移；优选地，所述第一荧光基团-第二荧光基团选自Cy5-Cy3、Cy7-Cy5、Alexa488-Cy3、FITC-Rhodamine。

4.根据权利要求1至3任一项所述的纳米探针，其特征在于，所述纳米颗粒带有正电荷；优选地，所述纳米颗粒为硅纳米颗粒、壳聚糖纳米颗粒、金纳米颗粒或银纳米团簇，更优选为硅纳米颗粒；优选地，所述纳米颗粒的粒径为1～20nm，优选为4～10nm。

5.根据权利要求1至3任一项所述的纳米探针，其特征在于，所述亚细胞可以选自线粒体、溶酶体、自噬体、内质网或高尔基体。

6.根据权利要求1至3任一项所述的纳米探针，其特征在于，所述亚细胞靶向探针选自4-羧丁基三苯基溴化膦、3-吗啉-4-基丙酸盐酸盐、4-(2-羟乙基)吗啉、TAT肽或硫酸软骨素。

7.如权利要求1至6任一项所述的纳米探针在检测、定位或成像亚细胞内部待测靶标中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，当待测靶标为miR-494时，所用的纳米探针为：第一纳米探针，亚细胞靶向探针-纳米颗粒-第一核酸探针-第一荧光基团；第二纳米探针，亚细胞靶向探针-纳米颗粒-第二核酸探针-第二荧光基团；其中，所述第一核酸探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述第二核酸探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，且所述第一荧光基团与所述第二荧光基团之间可以发生荧光共振能量转移。

9.如权利要求1至6任一项所述的纳米探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将所述亚细胞靶向探针和所述纳米颗粒通过偶合反应连接起来，得到连接有亚细胞靶向探针的纳米颗粒；

(2)将所述核酸探针与所述连接有亚细胞靶向探针的纳米颗粒进行偶合反应，即得纳米探针。

10.如权利要求1至6任一项所述的纳米探针检测、定位或成像活细胞中亚细胞器内部靶标的方法，其特征在于，包括将纳米探针与细胞共培养的步骤；优选地，在纳米探针与细胞共培养之前，还包括用转运载体将靶标的cDNA序列转入细胞的步骤。