[发明专利]鼻咽癌肿瘤模型的构建方法及应用

说明书

本发明实施例提供一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，包括以下步骤：将鼻咽癌细胞系悬液接种于非人动物的皮下后进行培养；待所述非人动物荷瘤后，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块；用接种针将所述肿瘤组织块接种在正常非人动物的鼻咽上；用所述接种针将组织粘合剂将接种口及所述肿瘤组织块粘合后进行培养。

技术领域

本发明涉及疾病模型技术领域，特别是涉及一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法及应用。

背景技术

鼻咽癌好发于鼻咽顶前壁和咽隐窝，是我国的高发肿瘤之一，也是我国发病率和病死率最高的头颈部肿瘤。其中以广东、广西、福建、湖南等省更为常见。鼻咽癌大多属于低分化鳞癌，以其高侵袭性、易转移、易复发闻名，目前鼻咽癌的治疗方案已经取得了良好的临床疗效，但转移性鼻咽癌治疗难度大，预后极差。大多数患者发现时已有转移，对患者带来极大危害，迫切需要我们对其进一步的研究。

目前国内外鼻咽癌的动物模型有：肿瘤细胞异位移植法、致癌物诱发法和转基因动物模型。致癌物诱导法需要长时间和特定致癌物，成功率较低，而且肿瘤的连续监测困难，无法一次性大批量产生，而转基因法成本高昂，两种动物模型都需要大量人力物力，但是成功与否有很大不确定性，无法推广。目前最常用的肿瘤细胞种植法采用的是通过皮下、鼠尾静脉、腹腔等途径注射悬浮肿瘤细胞，形成异位鼻咽癌模型，但这个模型有其最根本的缺点：不能完全模拟体内肿瘤生长微环境，其肿瘤生长与人体内生长方式有巨大差别，例如，研究最多的皮下移植瘤模型易形成包膜、不易转移、易中央坏死，需要我们对其加以改进，构建一个更好的原位模型，最大限度的贴合鼻咽癌在人体内的肿瘤生长微环境，模拟人体内肿瘤的生物学特性，对其进行更进一步研究。基于此，研究人员也发明了异种原位鼻咽癌模型，用胰岛素针穿过鼻咽管将合适浓度的细胞悬液注射至鼻咽，原位成瘤，通过成像技术检测荷瘤裸鼠活体成像肿瘤生物发光信号强度变化，并用软件量化捕捉荷瘤裸鼠活体成像肿瘤生物发光信号强度变化。而该原位成瘤的技术的缺点在于：①注射细胞悬液术中，裸鼠易将细胞悬液吸入气管并导致窒息死亡。②鼻咽是口腔与食管和气管之间的连续，在鼻咽注射细胞悬液，裸鼠容易通过呼吸或吞咽增加肿瘤的呼吸道和消化道转移，而这种转移并不是肿瘤本身的生物学特性引起的。

发明内容

基于此，有必要针对传统的鼻咽癌肿瘤模型构建难度大的问题，提供一种新的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法及应用。

一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，包括以下步骤：

将鼻咽癌细胞系悬液接种于非人动物的皮下后进行培养；

待所述非人动物荷瘤后，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块；

用接种针将所述肿瘤组织块接种在正常非人动物的鼻咽上；

用所述接种针将组织粘合剂将接种口及所述肿瘤组织块粘合后进行培养。

在其中一个实施例中，所述非人动物为啮齿动物。

在其中一个实施例中，所述啮齿动物为小鼠或裸鼠。

在其中一个实施例中，所述鼻咽癌细胞系为携带EB病毒的C666-1细胞系。

在其中一个实施例中，所述鼻咽癌细胞系能够表达荧光素酶。

在其中一个实施例中，能够表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系的制备方法包括：用携带荧光素酶基因的慢病毒感染C666-1细胞。

在其中一个实施例中，获得表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系悬液的步骤包括：将细胞浓度为(0.8～1.2)×10⁶/ml的所述表达荧光素酶的鼻咽癌细胞培养液与康宁基质胶混合。

在其中一个实施例中，所述组织粘合剂选自3M Vetbond。