[发明专利]一种预测肿瘤细胞化疗耐药性的标志物及其应用

说明书

本发明提供了一种预测肿瘤细胞化疗耐药性的标志物及其应用。具体方法为作为标志物的所述SirT7‑S288位点的磷酸化形式是在前期根据化疗药物胁迫结合磷酸化质谱鉴定筛选出来的在化疗药物处理后，SirT7‑S288位点磷酸化增强，通过制备针对SirT7‑S288位点特异的磷酸化抗体用以检测SirT7的磷酸化，作为肿瘤耐药的检测指标。本发明制作了特异的SirT7‑S288p磷酸化抗体，可特异性检测到接受化疗药物处理的肿瘤细胞中SirT7是否发生S288位的磷酸化，从而预见肿瘤细胞是否耐药。为肿瘤化疗药物的针对性选择提供可能性，为肿瘤精准治疗提供新思路。

技术领域

本发明属于肿瘤细胞耐药性检测技术领域，尤其涉及一种预测肿瘤细胞化疗耐药性的标志物及其应用。

背景技术

化疗在肿瘤的治疗中占有重要地位，但肿瘤细胞极易对化疗药物产生耐药性，一旦癌细胞产生耐药性，化疗药物就无法杀伤癌细胞，但却对正常细胞造成杀伤，引起越来越大的副作用，导致治疗失败，肿瘤细胞耐药性成为治疗肿瘤的最大障碍之一。肿瘤化疗采用最多的药物是DNA损伤药物，而DNA损伤药物对DNA造成的损伤可以通过细胞中不同的DNA修复机制得到修复，这也是细胞对DNA损伤药物产生耐药性的主要原因。然而，患者对化疗药物的耐受性是有个体差异的，如何预测药物的耐药性及敏感性是如何选择用药的关键。对于药物敏感性以及耐药性的许多潜在生物标记物研究已经有一些，但仅有极少数有潜在临床应用的可能，并且相对于分子靶向治疗及免疫检测点治疗的靶向指示性，DNA损伤药物缺乏相应的生物标记物来靶向指导药物的选择，因此，在个体化治疗以及精准医学背景下，开发研究更多的肿瘤耐药的检测指标，这也将是实施肿瘤预见、预后、个体化化疗的前提。

蛋白磷酸化修饰在肿瘤化疗耐药性中发挥重要的作用，蛋白磷酸化是将外界刺激转化为细胞内信号的一个主要机制，是一种广泛的翻译后修饰，同时也是原核和真核生物中最重要的调控形式。由于蛋白质氨基酸侧链加入了一个带有强负电的硝酸基团，发生酯化作用，从而改变了蛋白质的构型、活性及与其他分子相互作用的能力，在多种生物学过程，如信号传导、基因表达、细胞分裂等的调控中起重要作用，异常的蛋白质磷酸化通常与癌症有关。人类蛋白质组中含有十万多个潜在的磷酸化位点，大多数磷酸化蛋白含有一个以上的磷酸化位点，并且以不同磷酸化形式的混合物存在，在细胞内活性调控中发挥重要的作用。在肺癌细胞中，p-GSK-3βser9升高是造成肺癌耐药性的原因之一，Cx43-S368的磷酸化上调是造成卵巢癌化疗耐药的主要原因。因此，深入研究蛋白磷酸化修饰与肿瘤耐药的关系与调控机制，有利于开发肿瘤耐药预测指标及指导化疗用药。

组蛋白去乙酰化酶Sirtuin家族是调控肿瘤化疗耐药中非常关键的一类蛋白，它们是与酵母Sir2同源的相关酶类。Sirtuin家族由七个成员组成，SirT1-7，它们都有一个保守的NAD依赖的催化核心区，促进NAD依赖的去乙酰化酶活性以及ADP核糖转移酶活性。Sirtuins依赖于其去乙酰化活性，参与调控细胞的代谢、衰老、增殖、抗压及炎症氧化应激反应等。Sirtuins具有复杂的促癌或抑癌作用，其中SirT7是Sirtuin家族中唯一定位在核仁的蛋白，大量的癌症研究将SirT7归为原癌基因，一方面SirT7通过去乙酰化H3K18维持癌症的特征，另外一方面SirT7促进rDNA转录这一功能也正好符合癌细胞快速增殖对核糖体生成的需要。SirT7自身并没有表现出原癌基因的特性，因为过表达SirT7并不能导致原生纤维母细胞发生癌变，因此认为在癌细胞中SirT7过量表达可能是为了满足快速增殖的癌细胞对核糖体生成的需求。最近报道SirT7通过去琥珀酰化H3K22促进染色体凝集以及参与双链DNA损伤(DSB)修复，这些研究揭示SirT7可能作为肿瘤研究的热点蛋白，但SirT7能否作为肿瘤耐药检测或治疗的靶点，目前的研究还不够，还需要解决的问题是SirT7如何参与化疗药物胁迫以及SirT7的上下游调控如何。据报道，SirT7的磷酸化修饰介导SirT7的定位改变，对其功能影响至关重要。因此，研究SirT7的磷酸化修饰与肿瘤耐药的关系与调控将变得极为有意义，有利于寻找肿瘤化疗药物耐药性预测标志物，可实际用于临床肿瘤预测预后与指导化疗用药。

发明内容