[发明专利]一种评估胚胎发育潜力的方法

说明书

本发明涉及生殖医学技术领域，具体涉及一种评估胚胎发育潜力的方法，包括以下步骤，获得胚胎的培养液；确定所述培养液中线粒体DNA拷贝数；确认所述培养液中参考线粒体DNA拷贝数；将所述线粒体DNA拷贝数与所述参考线粒体DNA拷贝数进行比较，获得所述线粒体DNA的相对量。通过使用胚胎的培养液，获取培养液中的线粒体DNA拷贝数，并用线粒体的相对量来评估胚胎发育潜力，不需要对胚胎进行活检，评估过程对胚胎无创伤。

技术领域

本发明涉及生殖医学技术领域，具体涉及一种评估胚胎发育潜力的方法，特别是一种通过无创手段评估胚胎发育潜力的方法。

背景技术

胚胎质量始终是影响辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)成功率的最重要的因素，但是目前尚缺乏有效、客观和全面地评价胚胎质量的方法。

线粒体是细胞中重要的细胞器，除了可以为生命活动提供90％以上的能量外，也参与调节女性的生殖过程，在卵母细胞成熟、受精和早期的胚胎发育中扮演着关键角色。由于线粒体拥有一套独立的遗传物质，即线粒体DNA (mitochondrial DNA,mtDNA),它可以不完全依赖组基因进行半自主复制、转录和翻译，因此已有许多学者对胚胎mtDNA拷贝数与胚胎质量、胚胎发育潜能、妊娠结局的关系做了相关研究，但是研究结果不尽相同，并且大多数需通过胚胎活检技术等有创性研究方法。

但是，线粒体DNA拷贝数检测时用到的胚胎活检技术会对胚胎造成创伤。

发明内容

本发明的目的在于：针对现有技术存在的在胚胎活检技术对胚胎造成创伤的问题，提供一种评估胚胎发育潜力的方法，该方法通过检测D3卵裂器胚胎培养液中的线粒体DNA拷贝数，并将线粒体DNA拷贝数与形态学评分建立关联，提供了一种新的评估胚胎发育潜力的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种评估胚胎发育潜力的方法，包括以下步骤，

获得胚胎的培养液；

确定所述培养液中线粒体DNA拷贝数；

确认所述培养液中参考线粒体DNA拷贝数；

将所述线粒体DNA拷贝数与所述参考线粒体DNA拷贝数进行比较，获得所述线粒体DNA的相对量。

通过使用胚胎的培养液，获取培养液中的线粒体DNA拷贝数，并用线粒体的相对量来评估胚胎发育潜力，不需要对胚胎进行活检，评估过程对胚胎无创伤。

优选的，所述胚胎为D3胚胎。

优选的，所述培养液通过如下方法获得，

选取2PN胚胎转入过夜平衡的卵裂培养中单滴继续培养至D3，并按照20ul/ 滴的标准收集胚胎移植后剩余的培养液。

优选的，所述线粒体DNA的相对量用于评估胚胎发育潜力。

优选的，还包括对胚胎进行形态学评分，建立培养液中线粒体DNA拷贝数与形态学评分的关系。

优选的，所述胚胎发育潜力包括D3胚胎形态学总评价和D3细胞发育速度中的至少一项。

优选的，使用数字PCR检测确定所述培养液中线粒体DNA拷贝数；使用数字PCR检测确定所述培养液中参考线粒体DNA拷贝数。

优选的，使用数字PCR检测时，使用的培养液的量为20ul。

使用数字PCR仅需要20ul的培养液即能准确测试线粒体DNA拷贝数。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：