[发明专利]一种新型冠状病毒蛋白的快速免疫方法及其应用

说明书

本发明涉及免疫抗体技术领域，公开了一种新冠病毒蛋白的快速免疫方法及其应用。所述快速免疫方法为，以兔为试验对象，首免后5天即使用完全弗氏佐剂乳化抗原后进行第二次加强免疫，在第二次免疫后10天即进行第三次免疫，在第三次免疫后10天即进行第四次免疫，免疫完成后5天收集血清，后续经过抗血清protein G纯化后记得高特异性、高亲和力的多克隆抗体。本发明在首免后5天即进行加强免疫，能够在一个月内得到高亲和力和高特异性的新冠蛋白的多克隆抗体，大幅度缩短多克隆抗体的制备周期，可以为研究和解决新冠的传播提供非常及时的抗体试剂。

【技术领域】

本发明属于免疫抗体技术领域，具体涉及一种新冠病毒蛋白的快速免疫方法及其应用。

【背景技术】

新型冠状病毒SARS-CoV-2可通过人类上呼吸道入侵人体，以多种细胞表面表达的ACE2为受体达到感染，主要感染器官包括肺部、心脏、肾脏等多个主要器官。如何在短时间内获得高特异性，高亲和力的新型冠状病毒的抗体是整个行业需要解决的问题。获得快速的免疫方法，针对不同的抗原及需求有不同的方案选择，主要包括：免疫的动物、免疫的剂量、时间和途径。

免疫原合适剂量的选定应考虑抗原性强弱、分子量大小和免疫时间。抗原需可量多，时间间隔长，剂量可适当加大。大动物抗原剂量(以蛋白抗原为准)约0.5～1mg/只，小动物约0.1～0.6mg/只。剂量加大极易造成免疫耐受(免疫抑制)而遭失败。已有证明，几微克的蛋白质也能很好地免疫出抗血清。

免疫注射的途径也很重要。一般采用多点注射，一只动物注射总数约为8～10点，包括足掌及肘窝淋巴结周围，背部两侧、颌下、耳后等处皮内或皮下，皮内易引起细胞免疫反应，对提高抗体效价有利。

免疫间隔时间也是重要因素，特别是首次与第二次之间更应注意。传统的免疫方式认为第一次免疫后，因动物机体正处于识别抗原B细胞增殖阶段，如很快接着第二次注入抗原，极易造成免疫抑制。一般以间隔10～20天为好。二次以后每次的间隔一般为7～10天，不能太长，以防刺激变弱，抗体效价不高。

目前商业化抗体的主要目的，传统的免疫方式更多将精力放在如何提高动物免疫反应的强度及特异性上。从商业化产品出发，以客户角度思考，抗体的制备周期则需要更多的关注。

因此，有必要提供一种快速免疫方案。

【发明内容】

本发明目的在于克服现有技术的不足而提供一种新型冠状病毒蛋白的快速免疫方法、抗体及其应用，在常规的弗氏佐剂免疫基础上，通过周期的改良及佐剂的使用，更大幅度的刺激动物免疫反应，能够更快的获得高滴度的抗血清，纯化后得到所需的多克隆抗体。

为实现上述目的，本发明是通过如下方案实现的：

一种新型冠状病毒蛋白的快速免疫方法，包括如下步骤：

1.以兔为受体，第1天用完全弗氏佐剂，进行第一次免疫；

2.第5天，再重复步骤S1进行第二次免疫；

3.第15天，用非完全弗氏佐剂进行第三次免疫；

4.第25天，再重复步骤S3进行第四次免疫；

所述免疫使用的抗原为SARS-CoV-2重组蛋白。

根据本发明的实施例，所述免疫使用的抗原为SARS-CoV-2Nucleoprotein、SARS-CoV-2Spike RBD、SARS-CoV-2Spike S1或SARS-CoV-2Spike S2 ECD中的一种。

根据本发明的实施例，所述免疫使用的抗原为Abclonal RP01264、AbclonalRP01258、Abclonal RP01262或Abclonal RP01267中的一种。