[发明专利]一种呼吸道病毒检测试剂盒和方法

权利要求书

1.一种呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于检测SARS-COV-2病毒的ORF1ab区域和N区，包括以下引物和探针：扩增ORF1ab区域扩增引物ORF1ab-F、ORF1ab-R，探针ORF1ab-probe；扩增N区域扩增引物N-F、N-R，探针N-probe，其序列如下：

ORF1ab-F：TCTGCGGTATGTGGAAAGG

ORF1ab-R:TTATCATTGTAGATGTCAAAAGCC

ORF1ab-probe：FAM-TTGTGATCAACTCCGCGAACCCAT-BHQ1

N-F：GGCAGTAACCAGAATGGAGAAC

N-R:ATTTGGTCATCTGGACTGCTATT

N-probe：FAM-CAAAACAACGTCGGCCCCAAGGT-BHQ1。

2.根据权利要求1所述的呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括用于检测人源内标基因RNase P基因的以下引物和探针：扩增内标基因RNase P基因的扩增引物Rnase-P-F、Rnase-P-R，探针Rnase-P-probe，其序列如下：

Rnase-P-F：ATTGGGTGTTCAAGAGGAGG

Rnase-P-R：TCCCACTACAGCCCACTCC

Rnase-P-Probe：VIC-CAACAGGAAGACACCTTGGGGGAAC–BHQ1。

3.根据权利要求2所述的呼吸道病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。

4.一种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取血清的病毒RNA；

(2)将RNA反转录为cDNA；

(3)扩增：检测体系qPCR扩增反应液包括：ReverTra Ace qPCR RT Kit(TOYOBO公司)；THNDERBIRD Probe qPCR Mix(2×)、ORF1ab上、下游引物各0.8uM、ORF1ab探针0.4uM；N上、下游引物各0.8uM、N-probe(探针)0.4uM；Rnase-P上、下游引物各0.8uM、Rnase-P-probe(探针)0.4uM；其序列为：

ORF1ab-F：TCTGCGGTATGTGGAAAGG

ORF1ab-R:TTATCATTGTAGATGTCAAAAGCC

ORF1ab-probe：FAM-TTGTGATCAACTCCGCGAACCCAT-BHQ1

N-F：GGCAGTAACCAGAATGGAGAAC

N-R:ATTTGGTCATCTGGACTGCTATT

N-probe：FAM-CAAAACAACGTCGGCCCCAAGGT-BHQ1

Rnase-P-F：ATTGGGTGTTCAAGAGGAGG

Rnase-P-R：TCCCACTACAGCCCACTCC

Rnase-P-Probe：VIC-CAACAGGAAGACACCTTGGGGGAAC–BHQ1；

反应条件：95℃预变性1min；95℃15s，58℃35sec 40个循环；

(4)结果判断：将阈值线调整至背景信号及阴性扩增线以上，根据扩增曲线和阈值线读取Ct值；

1)内标和阳性参考均为阳性时，检测结果才认为有效；

2)阳性判断标准：Ct36，为阳性；35≤Ct≤38，为疑似阳性，需要再次验证；Ct＞38，为阴性。

3)核酸检测结果判定标准：当ORF1ab区和N区均为阳性时判定为病毒感染阳性；当ORF1ab区和N区一阴一阳时则需要重新检测；当两者都为阴性时则判定为核酸检测阴性结果。