[发明专利]水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记及其应用

权利要求书

1.一种水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-1，其特征在于，所述水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-1的片段长度为132bp，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

2.一种水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-2，其特征在于，所述水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-2的片段长度为143bp，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

3.权利要求要求1所述的水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-1在水稻抗稻瘟病育种中的应用。

4.权利要求要求2所述的水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-2在水稻抗稻瘟病育种中的应用。

5.用于扩增权利要求1所述的水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-1的引物对，其特征在于，所述引物对为Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物，所述Pi57-InDel-1FW引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Pi57-InDel-1RV引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

6.用于扩增权利要求2所述的水稻广谱抗稻瘟病基因Pi57的共分离分子标记Pi57-InDel-2的引物对，其特征在于，所述引物对为Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物，所述Pi57-InDel-2FW引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，Pi57-InDel-2RV引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

7.权利要求5所述的引物对在水稻抗稻瘟病育种中的应用。

8.权利要求6所述的引物对在水稻抗稻瘟病育种中的应用。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，

(1)当用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物通过PCR扩增目标水稻材料，目标水稻材料中扩增出132bp的片段，则目标水稻材料含有抗稻瘟病基因Pi57位点；用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物通过PCR扩增目标水稻材料，目标水稻材料中扩增出129bp的片段，则目标水稻材料不含有抗稻瘟病基因Pi57位点；用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物通过PCR扩增目标水稻材料，目标水稻材料中同时扩增出132bp和129bp两个片段，则目标水稻材料为含有抗稻瘟病基因Pi57位点的杂合水稻材料；

或(2)用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物通过PCR扩增目标水稻材料，目标水稻材料中扩增出143bp的片段，则目标水稻材料含有抗稻瘟病基因Pi57位点；用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物通过PCR扩增目标水稻材料，目标水稻材料中扩增出185bp的片段，则目标水稻材料不含有抗稻瘟病基因Pi57位点；用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物通过PCR扩增目标水稻材料，目标水稻材料中同时扩增出143bp和185bp两个片段，则目标水稻材料为含有抗稻瘟病基因Pi57位点的杂合水稻材料。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物的PCR扩增反应体系20μL，其中含有2×ES Taq Master Mix 10μL、10μM Pi57-InDel-1FW引物1μL、10μM Pi57-InDel-1RV引物1μL、10ng/μL模板DNA 1μL，ddH₂O 7μL；PCR扩增的反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s，61℃退火30s，72℃延伸1min，共32个循环；最终72℃延伸5min；

用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物的PCR扩增反应体系20μL，其中含有2×ES Taq Master Mix 10μL、10μM Pi57-InDel-2FW引物1μL、10μM Pi57-InDel-2RV引物1μL、10ng/μL模板DNA 1μL，ddH₂O 7μL；PCR扩增的反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，共32个循环；最终72℃延伸5min。