[发明专利]一种3D细胞微球石蜡切片方法

权利要求书

1.一种3D细胞微球的石蜡切片方法，包括下述步骤：(1)样品固定；(2)预染；(3)脱水；(4)透明；(5)浸蜡包埋；(6)切片、捞片和展片；(7)烤片；(8)脱蜡；(9)复水；和(10)染色；其中，其特征在于，所述的样品固定为：10％的中性福尔马林，室温固定20-60分钟。

2.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的细胞微球为肿瘤细胞微球、干细胞微球、肝细胞微球、神经细胞微球、乳腺微球或共培养微球。

3.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的预染为：水溶性伊红染液或番红染液染色2分钟。

4.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的脱水为：用乙醇或其溶液进行梯度脱水，依次顺序为：①75％乙醇5分钟，②90％乙醇5分钟，③95％乙醇3分钟，④无水乙醇5分钟/次、连续3次。

5.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的透明为：用二甲苯、甲苯、苯或三氯甲烷进行透明。

6.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的浸蜡包埋中浸蜡时间为5-10分钟。

7.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的切片、捞片和展片步骤中切片的厚度为2-6μm。

8.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的烤片为：42℃烘烤30分钟。

9.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的脱蜡为：二甲苯浸泡切片5分钟/次，重复3次。

10.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的复水为：用乙醇或其溶液浸泡切片复水，依次顺序为：①100％乙醇浸泡3分钟/次、连续2次，②95％乙醇浸泡2分钟，③70％乙醇浸泡2分钟。

11.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其特征在于所述的伊红染液配方为：水溶性伊红Y 0.5g，蒸馏水100mL，冰醋酸1滴。

12.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的石蜡是熔点为56-62℃的鳞片状切片石蜡。

13.根据权利要求1所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的染色为HE染色、免疫组织化学染色或免疫荧光染色。

14.根据权利要求13所述的3D细胞微球的石蜡切片方法，其中，所述的HE染色包括下述步骤：(1)去离子水冲洗；(2)苏木素染色；(3)自来水冲洗；(4)1％盐酸-75％乙醇分化；(5)蓝化处理；(6)终止分化；(7)伊红染色；(8)乙醇脱水；(9)二甲苯透明；和(10)封片；

所述的免疫组织化学染色包括下述步骤：(1)抗原修复；(2)通透；(3)封闭；(4)灭活过氧化物酶；(5)一抗孵育；(6)二抗孵育；(7)显色；(8)复染；(9)乙醇脱水；(10)二甲苯透明；和(11)封片；

所述的免疫荧光染色包括下述步骤：(1)抗原修复；(2)通透；(3)封闭；(4)一抗孵育；(5)二抗孵育；和(6)核染及封片。