[发明专利]分泌抗猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3A6株及其应用

说明书

分泌抗猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3A6株及其应用，属于生物领域，该杂交瘤细胞3A6株于2020年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：C2020248。该杂交瘤细胞3A6株既能与真核表达的VP2蛋白反应又能与猫细小病毒反应，生物学性能十分优良，制备的小鼠腹水单克隆抗体对病毒的中和效价高达5×10⁸、对VP2蛋白的反应效价高达10⁸，且对多种猫细小病毒毒株的中和能力相当，用于猫细小病毒感染发病猫的临床治疗，有效率达到100％。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种分泌抗猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3A6株及其应用。

背景技术

猫细小病毒病，又名猫瘟、猫泛白细胞减少综合征，是由猫细小病毒(Felineparvovirus，FPV)引起的一种以剧烈呕吐、腹泻、腥臭味粪便为主要表征的烈性传染病。该病以发病率高、传染性强、病程快、幼猫死亡率高为特点，是猫科动物最主要的传染性病毒病之一。FPV为细小病毒科细小病毒属的无囊膜单股负链DNA病毒，基因组全长5.2kb，编码NS1、NS2两种非结构蛋白及VP1、VP2、VP3三种结构蛋白。病毒的抗原表位通常位于其衣壳蛋白上，FPV病毒衣壳由60个结构蛋白组成，其中包括53～54个VP2蛋白，占衣壳蛋总量的90％，对FPV的抗原性起决定性作用。

目前预防该病使用的疫苗多为弱毒苗，但是许多幼猫在应用弱毒疫苗后仍会发生本病。分析原因，与母源抗体、疫苗效价、使用方法以及病毒变异有关。用弱毒疫苗免疫动物也未能得到完全保护，有许多免疫动物群体暴发猫细小病毒病，损失十分惨重。因此对猫细小病毒病除了积极的预防外，有必要对患病动物进行有效的治疗，将损失降到最小。猫细小病毒的高免血清常用于治疗猫细小病毒病，但制备成本较高，易传播其它病毒，抗体中和效价参差不齐，难以标准化。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌抗猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3A6株及其应用。本发明的一种分泌抗猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3A6株为发展单克隆抗体介导的特异猫细小病毒病治疗应用奠定了基础。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的分泌抗猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3A6株，于2020年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：C2020248。

本发明的杂交瘤细胞3A6株在制备猫细小病毒病单克隆抗体3A6治疗剂中的应用。

采用本发明的杂交瘤细胞3A6株制备的猫细小病毒病单克隆抗体3A6治疗剂。

采用本发明的杂交瘤细胞3A6株制备的猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体。

本发明的猫细小病毒VP2蛋白单克隆抗体在制备猫细小病毒病单克隆抗体3A6治疗剂中的应用。

本发明的有益效果是：

本发明用纯化的猫细小病毒抗原免疫BALB/c小鼠，制备免疫脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞系融合，以真核表达的VP2蛋白和纯化的猫细小病毒进行双重筛选，获得一株既能与真核表达的VP2蛋白反应又能与猫细小病毒反应的单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为3A6。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明使用的BALB/C小鼠免疫原使用的是FPV当前流行毒株制备的。已有报道显示，筛选的VP2蛋白单克隆抗体的免疫原为原核表达系统表达的VP2蛋白，而本发明采用的VP2蛋白来源于昆虫杆状病毒表达系统(一种真核表达系统)，尽管VP2蛋白氨基酸序列高度保守，但是不同表达系统所产生的蛋白在蛋白翻译后修饰水平不一，因此其免疫抗原存在一定差异。