[发明专利]一种基于茎环法的多重荧光定量PCR检测非编码小RNA的引物组

权利要求书

1.一种荧光定量PCR检测非编码小RNA的引物组，其特征在于，包括逆转录延伸引物、逆转录引物、上游通用引物、下游通用引物和特异性探针；

所述逆转录延伸引物从5’端到3’端依次为：上游通用引物序列和特异性结合序列1；所述特异性结合序列1与待检测的非编码小RNA的5’端的6～15个碱基相同；所述上游通用引物序列为16～25个碱基；所述逆转录延伸引物的3’端不能继续延伸；所述上游通用引物序列不与待检测的非编码小RNA序列同义或互补，所述上游通用引物的碱基数量为16～25个；

所述逆转录引物的5’端到3’端依次为：茎环序列和特异性结合序列2，所述特异性结合序列2为 待测非编码小RNA的3’端的6～12个碱基 的反向互补序列；

所述上游通用引物，其序列与所述的逆转录延伸引物中的上游通用引物序列相同；

所述下游通用引物，其序列与所述的逆转录引物中的茎环序列的部分相同，其碱基数量为16～25个；

所述特异性探针与待检测非编码小RNA序列的部分片段相同，其碱基数量为17～30个。

2.一种非疾病治疗诊断目的荧光定量PCR检测非编码小RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将权利要求1所述的逆转录延伸引物、逆转录引物和待检测非编码小RNA在同一体系内进行逆转录反应，得到逆转录产物；

S2.以步骤S1的逆转录产物为模板，使用权利要求1所述的上游通用引物、下游通用引物、特异性探针进行荧光定量PCR反应。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，进行多重荧光定量PCR检测多个非编码小RNA，特异性探针5’端分别标记不同的发光基团，所述多个非编码小RNA为2～5个非编码小RNA。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，权利要求1所述逆转录引物、逆转录延伸引物、上游通用引物、下游通用引物和特异性探针的体系终浓度均为50～200nM。

5.权利要求1所述引物组在非疾病治疗诊断目的荧光定量PCR检测非编码小RNA中的应用，或在制备荧光定量PCR检测非编码小RNA的试剂盒中的应用。