[发明专利]KLHL22-DEPDC5蛋白相互作用筛选系统

说明书

本发明公开了一种KLHL22蛋白和DEPDC5蛋白相互作用筛选系统。该系统包括pHTC‑KLHL22质粒和pNLF1‑N‑DEP质粒；所述pHTC‑KLHL22质粒是将编码KLHL22蛋白的基因插入pHTC质粒的多克隆位点得到的重组质粒；所述pNLF1‑N‑DEP质粒是将编码DEPDC5蛋白DEP结构域的DNA分子插入pNLF1‑N质粒的多克隆位点得到的重组质粒。

技术领域

本发明属于药物筛选领域，具体涉及一种KLHL22-DEPDC5蛋白相互作用筛选系统。

背景技术

目前，在药物筛选领域，已经有多种用于蛋白-蛋白相互作用的检测系统，主要分为基于蛋白的药物筛选系统和基于细胞的药物筛选系统，其中蛋白层面的药物筛选系统包括ALPHA系统，HTRF系统等，其特点为最终检测时为裂解状态或蛋白纯化状态。而另外基于细胞的药物筛选系统即在细胞存活的状态下检测蛋白质的相互作用，主要包括FRET和BRET等技术。

KLHL22是一个重要的E3泛素化连接酶，其底物包括PLK1，DEPDC5和PD-1等，在细胞生长、增殖以及癌症形成方面具有重要调控作用。在此前的报道中，KLHL22通过泛素化DEPDC5激活了mTOR信号通路进而促进三阴性乳腺癌的增殖。基于此，发明人希望能够开发指示DEPDC5-KLHL22相互作用的系统，进而开发三阴性乳腺癌相关的药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种KLHL22蛋白和DEPDC5蛋白相互作用筛选系统。

本发明所提供的KLHL22蛋白和DEPDC5蛋白相互作用筛选系统，包括pHTC-KLHL22质粒和pNLF1-N-DEP质粒；

所述pHTC-KLHL22质粒是将编码KLHL22蛋白的基因插入pHTC质粒的多克隆位点得到的重组质粒；

所述pNLF1-N-DEP质粒是将编码DEPDC5蛋白DEP结构域的DNA分子插入pNLF1-N质粒的多克隆位点得到的重组质粒。

进一步的，所述pHTC-KLHL22质粒是将编码KLHL22蛋白的基因插入pHTC质粒的SacII酶切识别位点与XbaI酶切识别位点间，得到的重组质粒；

进一步的，所述pNLF1-N-DEP质粒是将编码DEPDC5蛋白DEP结构域的DNA分子插入pNLF1-N质粒的SacII酶切识别位点与XbaI酶切识别位点间，得到的重组质粒。

其中，所述KLHL22的蛋白氨基酸序列如序列表中序列1所示；所述DEPDC5蛋白DEP结构域的氨基酸序列如序列表中序列2所示；

所述编码KLHL22蛋白的基因的核苷酸序列如序列表中序列3所示；所述编码DEP结构域的DNA分子的核苷酸序列如序列表中序列4所示。

进一步的，所述pHTC-KLHL22质粒和pNLF1-N-DEP质粒的质量配比可为1：(0.001-1)，优选为1：(0.001-0.1)，更优选为1：(0.001-0.01)。

进一步的，所述筛选系统还包括HEK-293T细胞。

进一步的，所述系统还包括配基和荧光素底物。

所述配基具体可为NanoBRET^TM 618Ligand，所述荧光素底物具体可为萤光素酶底物。

本发明还提供上述KLHL22蛋白和DEPDC5蛋白相互作用筛选系统的应用。

本发明所提供的KLHL22蛋白和DEPDC5蛋白相互作用筛选系统的应用是其在制备药物筛选试剂盒中的应用。

所述药物可为预防和/或治疗乳腺癌(如三阴性乳腺癌)相关的药物。

本发明还提供了一种预防和/或治疗乳腺癌相关药物的体外筛选方法。