[发明专利]牛黄解毒片中黄芩规范投料的快速鉴定方法

说明书

本发明公开了一种牛黄解毒片中黄芩规范投料的快速鉴定方法，该方法是以黄芩苷和汉黄芩苷为对照品，采用高效液相色谱法进行测定，得到牛黄解毒片的高效液相色谱图，通过汉黄芩苷色谱峰峰面积与黄芩苷色谱峰峰面积对比进行判断，当汉黄芩苷色谱峰峰面积大于黄芩苷色谱峰峰面积的50%时，黄芩存在不规范投料的现象。本发明的方法采用高效液相色谱法快速得到汉黄芩苷、黄芩苷的色谱峰峰面积，仅通过两种成分的色谱峰峰面积比即可判断出黄芩是否存在不规范投料的现象，鉴定成本低、时间短、操作简便，且鉴定结果较为准确。通过本发明的鉴定方法对牛黄解毒片进行鉴定分析，可以规范牛黄解毒片中黄芩的投料方式，保证药效及用药安全。

技术领域

本发明涉及中医药质量检测技术领域，具体是一种牛黄解毒片中黄芩规范投料的快速鉴定方法。

背景技术

牛黄解毒片是由享八百年历史名药的牛黄解毒丸改变剂型研制而成，为清热解毒名方，主治火热内盛、咽喉肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮、目赤肿痛等，疗效确切，现今仍为临床常用药物，是很多家庭常备的“祛火药”。《中国药典》中记载牛黄解毒片由大黄200g、黄芩150g、桔梗100g、甘草50g、石膏200g、人工牛黄5g、冰片25g、雄黄50g八味中药制成，其中黄芩为水煎煮液浓缩的干浸膏入药。现有研究表明，黄芩的主要成分为黄芩苷、 黄芩素、 汉黄芩苷和汉黄芩素等黄酮类化合物，黄芩会因保存或者炮制不当而使黄芩苷元中邻三酚羟基被氧化，转化成醌类衍生物而变绿，使有效成分黄芩苷收到破坏，质量随之降低。所以在牛黄解毒片中黄芩苷的含量是确定其质量的重要指标。现有技术中公开了很多关于牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定方法，也有很多关于黄芩中黄芩苷、 黄芩素、汉黄芩苷或汉黄芩素成分的含量测定方法；但是对于牛黄解毒片中黄芩的质量控制仅凭测定黄芩苷的含量并不能保证牛黄解毒片的用药安全及疗效。

薛胜利等人运用 HPLC 法测定不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量，测定结果显示三个不同厂家的数值不相同，其含量在0.98%～2.49%之间，相差较远，这势必会对临床疗效产生一定的影响。其还公开了HPLC的检测方法为：对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品10mg，置10ml 量瓶中，加甲醇溶解，并稀释到刻度，摇匀，超声振荡使充分溶解，配制成1mg/ml 的溶液，作为对照品储备液。供试品溶液的制备：取牛黄解毒片20片，研细，称取适量，置于容量瓶中，加甲醇至刻度，称重。超声提取 30min，补足减失的重量，摇匀，5000r/min 离心15min，取上清液，即得所需浓度的供试品溶液。色谱条件及系统适应性试验：色谱柱：DiamonsilC18柱（250nm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-水-磷酸（50: 50: 0.2），流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；柱温：20℃。进样量：20μl。取黄芩苷对照品和牛黄解毒片样品溶液各 20μl 进样，记录色谱图，见图 1、2。本实验条件下，黄芩苷与样品中其他成分达到基线分离，分离度大于 1.5，理论塔板数大于2000（薛胜利，孟娜娜，李珂. HPLC法测定不同厂家牛黄解毒片中黄芩苷的含量[J]《泰山医学院学报》，2015年1期）。吴琼莲等人对牛黄解毒片含量测定项下高效液相色谱图进行分析，结果发现，按有关标准检验合格的云南、贵州、广东、广西9家药厂生产的13批牛黄解毒片，在同一色谱条件下含量测定的高效液相色谱图间存在显著差异，说明某些厂家在生产牛黄解毒片时，有偷工减料、使用不合格原辅料或未按规定工艺生产的嫌疑。建议在牛黄解毒片的质量标准中增加以牛黄解毒片标准浸膏为对照的液相色谱鉴别，规定样品含量测定的高效液相色谱图中应有与对照浸膏相同的色谱共有峰（吴琼莲，何继祥，陈忠琴，许庆.牛黄解毒片质量标准中含量测定项应予改进[J]《中国药业》ISTIC-2007年4期）。马宁等人以1%乙醇溶液作为溶出介质，建立了牛黄解毒片中黄芩苷的溶出度测定方法，结果表明，不同厂家及同一厂家不同批号的样品之间的溶出度差异较大，非常不利于稳定中药片剂的疗效（马宁，龚秋红，欧燕，黄海萍，李焕德.牛黄解毒片溶出度测定方法的研究[J] 《湖南中医药导报》ISTIC-2004年5期）。