[发明专利]一种Il21基因敲除小鼠模型及其构建方法、应用

权利要求书

1.一种Il21基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、基于CRISPR/Cas9技术，确定Il21基因的敲除区域，根据确定的敲除区域设计特异性靶位点sgRNA1和sgRNA2，gRNA1和gRNA2的基因序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

S2、将有活性的gRNA1、gRNA2、cas9蛋白显微注射入小鼠受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕雌鼠体内，待其怀孕产仔获得F0代小鼠；

S3、将步骤S2获得的F0代小鼠与野生型小鼠交配，获得的F1代杂合子；

S4、将步骤S3获得的F1代杂合子近交获得F2代小鼠即为IL21基因敲除小鼠模型。

2.根据权利要求1所述的一种Il21基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，先确定F0代小鼠的基因型，筛选杂合子小鼠与野生型小鼠交配，获得的F1代杂合子。

3.根据权利要求2所述的一种Il21基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，F0代小鼠的基因型确定过程如下：

提取F0代小鼠的基因组DNA依次进行PCR扩增和测序鉴定，确认基因型；其中，PCR扩增的引物包括F1、R1、F2和R2，所述F1、R1、F2和R2的基因序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；测序引物的基因序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根据权利要求2所述的一种Il21基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，获得的F1代杂合子包括5种类型，分别为敲除类型1、敲除类型2、敲除类型3、敲除类型4、敲除类型5，其中，敲除类型1缺失6281个碱基对，敲除类型2缺失6282个碱基对，敲除类型3缺失6272个碱基对，敲除类型4缺失6283个碱基对，敲除类型5缺失6279个碱基对，将敲除类型1的F1代杂合子近交获得F2代小鼠。

5.根据权利要求2所述的一种Il21基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，F1代杂合子的类型确定过程如下：

提取F1代小鼠的基因组DNA依次进行PCR扩增和测序鉴定，确认基因型；其中，PCR扩增的引物包括F1、R1、F2和R2，所述F1、R1、F2和R2的基因序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，测序引物的基因序列如SEQ ID NO.7所示。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种Il21基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，骤S1中确定的敲除区域为Il21-201(ENSMUST00000029273.7)转录本的exon3-exon5。

7.如权利要求1-6任一项所述的一种Il21基因敲除小鼠模型的构建方法构建的Il21基因敲除小鼠模型。

8.一种敲除Il21基因的细胞。

9.一种Il21基因敲除小鼠模型，其特征在于，包括敲除Il21基因的细胞。

10.如权利要求8或9所述Il21基因敲除小鼠模型在肿瘤愈后相关研究中的应用。