[发明专利]一种花生蛋白特征肽及其应用

说明书

本发明属于蛋白标志物生物检测领域，具体涉及一种花生蛋白特征肽及其应用，该特征肽的氨基酸序列为ENEGGNIFSG。本发明通过超高效液相色谱串联飞行时间质谱方法筛选出特征肽，并设计合成对应的内标物，采用高效液相色谱与质谱联用的分析技术，计算获得花生加工副产品中花生过敏源蛋白的含量，进一步可以获得花生蛋白的含量，该方法具有较好的线性、灵敏度、回收率和精密度。

技术领域

本发明涉及一种花生蛋白特征肽及其应用，尤其涉及一种针对花生油提取副产物的特征肽，具体涉及一种来源于花生Arah3/4蛋白的特征肽，及其在花生生产加工中的应用。

背景技术

花生是我国重要的油料作物和经济作物，其油脂含量在46％-62％之间，大多数为不饱和脂肪酸。花生油气味清香，滋味纯正，营养丰富，是我国当前主要的油脂资源。我国目前花生油提取方法有压榨法、溶剂浸出法、水剂法、水酶法，除了水酶法缺陷较小，其他三种方法虽然各有优点，但缺陷也很明显。在油脂生产过程中，除了获得油脂产品外，还得到各种各样的加工副产物。我国每年植物油精炼所产生的副产物数量巨大，这些副产物如不加以利用，不仅资源浪费，还会造成严重的环境污染。目前对植物油精炼副产物利用的主要途径有生产脂肪酸、制取磷脂产品、生产生物柴油等，但是其中花生组分的含量多少直接影响到副产物的品质和下一步应用，尤其是涉及到脱脂花生粕的食品加工行业，判断其中的花生成分极其重要。同时，花生过敏是由花生中的某些蛋白引起的超敏反应，严重威胁着过敏患者的身体健康，需要对其中的过敏原进行相应的检测保证产品质量。目前，世界卫生组织和国际免疫学会联合会(WHO/IUIS)致敏原命名小组委员会公布了多种花生致敏原，并将其命名为Arah1～Arah17。其中，Arah3/4是其中的重要组分，占花生总蛋白的3.7%～4.3%。经研究发现Arah3/4蛋白具有4个线性IgE结合表位，因此该致敏原对温度、ph、酶解等较不敏感，含量较为稳定。

花生仁粕是以花生米经榨取提炼出燃料后的商品，一般花生仁粕分一次粕，二次粕。可是在实际中除开花生仁粕，也有豆饼、花生仁渣。花生仁渣指的是用的是花生仁来压榨油后剩余的花生仁渣，花生仁渣的营养价值较高，其中，粗蛋白质含量可达48%以上。精氨酸含量高达5.2%。但是传统高温压榨后花生仁渣中蛋白质严重变性，营养与物化特性降低，通常只用作饲料或肥料，无法开发花生蛋粉、花生奶、分离蛋白等高附加值的产品。而申请人在前期研究过程中采用分级、烘干、调质、压榨等技术制备炒胚水提压榨花生油，明确了最优参数，制备的花生油达到我国一级花生油的标准。花生油中总甾醇含量为114.57毫克/100克，不饱和脂肪酸如亚油酸、花生酸等含量为35.3%和1.7%，均高于普通方法压榨的花生油。最关键的是，副产物花生仁渣中残油率低，蛋白氮溶指数为73.58%，远高于普通压榨11.6%的水平，变性程度显著降低，可以通过再加工制备花生蛋白粉、花生蛋白奶、花生酱等产品，但是现有技术中缺乏相应的手段对其中的致敏原、花生蛋白有效成分等进行检测，无法实现可以指标化的质控标准。而且现有技术中同样也缺乏针对花生蛋白粉、花生蛋白奶、花生酱等产品中有效花生成分含量的有效检测手段。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述背景技术的不足，本发明提供了来源于花生Arah3/4蛋白的特征肽，所述特征肽可以用于检测花生产品，尤其是花生生产副产品的生物检测，更进一步的涉及炒胚水提花生生产工艺中的检测。使用该特征肽可以准确检测样品中的花生Arah3/4蛋白含量，进一步可以半定量的获得花生总蛋白的含量，具有较高的特异性、灵敏度、回收率和精密度。

其中所述的特征肽选自：ENEGGNIFSG；

同时，本申请还提供内标特征肽，其中所述的内标特征肽选自：ENEGGNIFS*G，其中S*为碳氮全同位素标记的氨基酸；

进一步的，本发明提供一种上述蛋白特征肽在样品检测中的应用方法，包括如下步骤：