[发明专利]一种当归补血药物组合物的制备方法及其检测方法

权利要求书

1.一种当归补血药物组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体为：取黄芪300～500份、当归70～90份，置于电子煎药罐中，加水4000～6000ml，浸泡20～60min，加盖煎煮，武火煮沸转为小火煎煮保持微沸，煎煮40～80分钟，200目滤布趁热滤过，滤液在真空减压、温度45～75℃条件下浓缩至100～400ml，浓缩液在温度-40～-80℃，真空度＜300Pa的条件下经冷冻干燥，收集干膏粉，即得，或收集干膏粉后加入药学上可接受的辅料制成药学上可接受的剂型。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体为：取黄芪400份、当归80份，置于电子煎药罐中，加水4000ml，浸泡40min，加盖煎煮，武火煮沸转为小火煎煮保持微沸，煎煮60分钟，200目滤布趁热滤过，滤液在真空减压、温度55～65℃条件下浓缩至200ml，浓缩液在温度-50～-70℃、真空度＜300Pa的条件下经冷冻干燥，收集干膏粉，即得，或收集干膏粉后加入药学上可接受的辅料制成药学上可接受的制剂。

3.根据权利要求1-2任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的药学上可接受的制剂为固体制剂或液体制剂，所述的固体制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、冻干粉针剂；所述液体制剂为注射制剂、口服液。

4.一种当归补血药物组合物的检测方法，其特征在于，该检测方法用于检测权利要求1-2任一项所述制备方法或权利要求3所述制备方法制出的产品，具体检测方法为：

性状为：本品为浅黄色粉末；气微，味微甜；

黄芪薄层鉴别方法为：

取本品1.0～3.0g，加水15～35ml使溶解，超声处理20～40分钟，滤过，滤液用水饱和正丁醇振摇提取2～4次，每次15～35ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2～4次，每次20～40mL，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪饮片1～2g，加水40～60ml，煎煮20～40分钟，滤过，同法制成对照药材溶液；再取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

当归薄层鉴别方法为：

取本品1.0～3.0g，加0.5～1.5％碳酸氢钠溶液40～60ml，超声处理5～15分钟，离心，取上淸液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2～4次，每次15～25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1.0～3.0g，加水40～60ml，煎煮20～40分钟，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4：1：1：0.1的环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查水份的方法为：照《中国药典》2015年版四部通则0832第二法测定水分不得过12.0％；

检查浸出物的方法为：取本品2g，精密称定，照《中国药典》2015年版四部通则2201醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，醇溶性浸出物的含量应为30.0～55.0％；

指纹图谱检测：照高效液相色谱法《中国药典》2015年版四部通则0512测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，按规定进行梯度洗脱；检测波长为柱温理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于5000；梯度洗脱规定为：

时间(min) 乙腈(A) 0.1％磷酸(B)

0 20 80

60 40 60

参照物溶液的制备 取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量、阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含200μg毛蕊异黄酮葡萄糖苷、含100μg阿魏酸混合溶液，即得；

供试品溶液的制备 精密称定本品用甲醇超声滤过，滤液减压回收溶剂至近干，残渣加20ml水溶解，用水饱和正丁醇萃取次，每次25ml，合并正丁醇溶液，用的氨试液萃取1次，弃氨试液，正丁醇层溶液挥干，残渣用2ml水溶解，经装有10mlD101大孔吸附树脂的柱色谱，先用水洗脱，后用95％乙醇洗脱，将95％乙醇洗脱液减压回收溶剂至近干，50％甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，滤过，即得；

测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；

供试品指纹图谱中应呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰，供试品色谱图应与对照指纹图谱基本一致，有相对应的10个共有峰，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以共有峰计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90，对照指纹图谱见图1。

含量测定 照高效液相色谱法《中国药典》2015年版四部通则0512测定；

黄芪含量测定

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为35：65的乙腈-水为流动相；蒸发光散射检测器检测，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品精密称定，精密加水称定重量，以功率720W，频率40kHz超声处理分钟，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，用水饱和的正丁醇振摇提取次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤次，每次弃去氨试液洗液，分取正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法 精密吸取对照品溶液10μL、20μL，供试品溶液20μL，注人液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得；

本品按干燥品计算，每g含黄芪以黄芪甲苷计，应为0.40～2.3mg；

当归含量测定

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17：83的乙腈-0.085％磷酸溶液为流动相；检测波长为柱温35℃，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加60～80％甲醇制成每1mL含12μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品粉末1.5～3.5g，精密称定，加水使之溶解，转移至50ml的容量瓶中，加水定容至刻度，量取水溶液10ml于25ml的容量瓶中，精密量取，加甲醇定容至刻度，即得供试品溶液；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按干燥品计算，每g含当归以阿魏酸酸计，应为0.001～0.817mg。