[发明专利]一种云杉种子表面灭菌方法及灭菌用培养皿

说明书

本发明属于种子处理领域，具体涉及一种云杉种子的表面灭菌技术。具体技术方案为：使用20％～30％，w/v，的H₂O₂溶液浸泡种子5～30min。使用特定培养皿进行灭菌操作，所述培养皿至少包括两层，其中一层为可盛放待灭菌种子的处理层，各层间可控进行液体流通。本发明首次提供了一种可用于云杉种子表面灭菌方法，灭菌效果高达100％；并基于该方法提供了一种种子萌芽方法，最高发芽率也高达100％。为了更便捷、准确地进行灭菌，本发明还提供了一种培养皿，可同时进行多梯度、多重复灭菌试验，有效提高了灭菌效果。

技术领域

本发明属于种子处理领域，具体涉及一种云杉种子的表面灭菌技术。

背景技术

为了研究云杉种子内生菌对种子萌发和幼苗定植的影响，首要解决的问题是通过对种子表面微生物灭菌来获取种子内生菌。但由于种子表面灭菌技术的局限性，相同的灭菌剂、灭菌浓度以及灭菌时间对不同种子表面的微生物会有不同的灭菌效果。对于云杉种子，目前较多的是采用0.3％的K₂MnO₄溶液浸泡15min，进行简单的消毒。但这样的操作无法将种子表面的微生物消灭干净，而且残留的有害微生物可能还会影响种子的萌发。

同时，现有的灭菌用设备(培养皿等)需要分次进行人为操作，难以同时间进行一批试验，分次操作也增加了种子被杂菌污染的可能性，降低了灭菌效果。

因此，亟需一种能将云杉种子表面微生物杀灭干净的技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种云杉种子的表面灭菌和萌发的方法及装置。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种云杉种子表面灭菌的方法，使用20％～30％，w/v，的H₂O₂溶液浸泡种子5～30min。

优选的，使用特定培养皿进行灭菌操作，所述培养皿至少包括两层，其中一层为可盛放待灭菌种子的处理层，各层间可控进行液体流通。

优选的，所述培养皿包括两层，另一层为可盛放液体的废液层，废液层位于处理层下方，处理层与废液层间设置第一液体流通结构，所述第一液体流通结构包括设置于处理层下方的连通排废板，所述处理层上贯穿设置至少一个上层第一排废孔，所述连通排废板上对应设置至少一个下层第二排废孔，连通排废板可相对于处理层旋转，使上层第一排废孔旋转至与下层第二排废孔对齐，实现废液从处理层流入废液层中。

相应的，所述的云杉种子表面灭菌后种子萌芽方法，将灭菌后的种子置于PDA培养基或LB培养基上，在30℃的黑暗环境保持5～7天，随后在15℃，12h光照、12h黑暗交替环境中保持5～20天，进行萌芽。

相应的，一种可用于种子灭菌的培养皿，至少包括两层，其中一层为可盛放待处理物料的处理层，各层间可控进行液体流通。

优选的，包括两层，另一层为可盛放液体的废液层，废液层位于处理层下方，处理层与废液层间设置第一液体流通结构，所述第一液体流通结构包括设置于处理层下方的连通排废板，所述处理层上贯穿设置至少一个上层第一排废孔，所述连通排废板上对应设置至少一个下层第二排废孔，连通排废板可相对于处理层旋转，使上层第一排废孔旋转至与下层第二排废孔对齐，实现废液从处理层流入废液层中。

优选的，所述培养皿内、水平方向设置为相互独立的数格，每层对应设置为数格，连通排废板可同时调控每格内的液体释放。

优选的，所述处理层与连通排废板间设置数块独立排废板，所述独立排废板的数量与培养皿内设置的格数相等；所述独立排废板可相对于处理层和连通排废板旋转；

所述处理层上贯穿设置上层第一、第二排废孔，所述独立排废板上对应贯穿设置中层第一、第二排废孔，所述连通排废板上对应贯穿设置下层第一、第二排废孔，各孔均设置至少一个；