[发明专利]一种检测钙离子的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及体外检测技术领域，尤其涉及一种检测钙离子的试剂盒及其应用。用于缓冲的试剂1和用于显色的试剂2；所述试剂1包括：稳定剂；所述试剂2包括邻甲酚酞络合酮；所述稳定剂为天然或合成的多糖，或甘油，所述稳定剂在试剂1中浓度为250‑500g/L。本发明通过在邻甲酚酞络合酮法检测钙离子的试剂中加入天然或合成的多糖，或甘油作为稳定剂，增加溶液粘度，阻碍二氧化碳在气液界面和溶液内部的扩散行为，有效延长开盖稳定期达4倍以上，在延长pH值对于检测准确性有明显影响的检测方法中具有重要意义。

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，尤其涉及一种检测钙离子的试剂盒及其应用。

背景技术

钙测定试剂盒是用于体外定量检测人血清样本中钙含量的试剂盒，作辅助诊断用。钙离子是机体内含量最多的五种元素之一，参考范围非常窄（2.20-2.55mmol/L），临床生物化学常规检验项目分析质量指标中规定总误差为5%。钙的生理功能主要为：构成骨骼和牙齿、持和修补骨骼的完整、传导神经冲动、维持细胞的正常生理通透性、参与凝血过程、激活酶的活性等。人体中钙含量的变化能反映出诸多代谢调节情况成人体内的钙离子大部分以胞外钙的形式存在，因此对钙含量的检测有很重要的临床意义。

现有的检测方法有滴定法、比色法、原子吸收分光光度法、酶法和同位素稀释质谱法等。其中，比色法由于其操作简便、结果准确等优点，为常用检验方法之一。常用检测钙的比色法根据显色剂不同可分为邻甲酚酞络合酮法、偶氮胂III法、偶氮膦或者偶氮氯膦法等。偶氮胂III、偶氮膦等偶氮类显色剂均有一定毒性，因此邻甲酚酞络合酮法应用广泛。然而邻甲酚酞络合酮法的显色非常依赖溶液pH，pH变化会导致钙与邻甲酚酞络合酮反应程度改变而影响结果准确性。邻甲酚酞络合酮法最佳反应pH为10.5~11。在日常使用过程中，碱性的试剂容易吸收环境中的二氧化碳而导致试剂pH降低，从而影响试剂的稳定性，导致频繁定标，影响检测准确度和重复性，造成严重成本的浪费。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种检测钙离子的试剂盒及其应用。本发明通过添加稳定剂，增加溶液粘度，阻碍二氧化碳在气液界面和溶液内部的扩散行为，有效延缓溶液的pH变化速率，保证钙离子检测试剂盒的稳定性。

第一方面本发明提供一种检测钙离子的试剂盒，包括：用于缓冲的试剂1和用于显色的试剂2；所述试剂1包括稳定剂；所述试剂2包括邻甲酚酞络合酮；

所述稳定剂为天然或合成的多糖，或甘油，所述稳定剂在试剂1中浓度为250-500g/L。

邻甲酚酞络合酮法检测钙离子的测定原理是:在一定碱性条件下，邻甲酚酞络合酮与Ca²⁺、Mg²⁺螯合成紫红色的可溶性螯合物，在一定波长有吸收峰。所以通常在试剂中加入一定量的Mg²⁺掩蔽剂屏蔽Mg²⁺的干扰，进而通过比色法检测得到Ca²⁺的浓度。从邻甲酚酞络合酮法的原理来看，其检测时的pH值至关重要，当pH值降低时，会导致邻甲酚酞络合酮与Ca²⁺、Mg²⁺螯合能力变差，影响实际检测的准确率。因此本发明向试剂盒中加入天然或合成的多糖或者甘油，甘油和多糖一方面不会影响邻甲酚酞络合酮与Ca²⁺的螯合，另一方面在加入至缓冲液中后会提高缓冲液的粘稠度，使其形成多重缓冲体系，这可以有效阻碍二氧化碳在气液界面和溶液内部的扩散行为，提高检测试剂pH值的稳定性。并且，本发明发现在一定浓度范围内，稳定剂不会影响试剂盒的检测效果，但若是添加过多稳定剂，则会导致粘稠度太高，检测结果的准确性反而降低，可重复性也同样降低。

进一步地，所述稳定剂包括甘油、甘露醇、海藻糖、山梨糖醇、明胶、右旋糖酐类、羟乙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟甲基纤维素钠中的一种或多种。

进一步地，所述试剂1还包括缓冲液和表面活性剂；

所述表面活性剂为非离子表面活性剂，在试剂1中浓度为1-15 g/L。