[发明专利]一种填装有固定化L-天冬酰胺酶的血液灌流器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种填装有固定化L-天冬酰胺酶的血液灌流器，将固定化酶装填至两端带有滤网的管中，滤网外部有上下封头，封头上有进出液体的接口，其特征在于：

采用高分子树脂载体固定化L-天冬酰胺酶，以填充柱的形式填充至血液灌流器中；

每只灌流器中装载量有5-500g固定化L-天冬酰胺酶；

所述血液灌流器中固定化L-天冬酰胺酶床层径高比为1/(1-50)；

所述的高分子树脂载体为胺基型载体；所述胺基型载体与L-天冬酰胺酶在pH4-10介质中，在温度22-50℃下，反应12-72小时，将L-天冬酰胺酶固载于胺基型载体上；

所述固定化L-天冬酰胺酶的酶活为90-250u/g；

所述固定化L-天冬酰胺酶的制备方法，具体步骤包括：

（1）胺基型载体的制备

将单体和交联剂利用悬浮聚合法，制备环氧型基球，再将环氧型基球与有机胺进行反应，得到胺基型载体；

（2）胺基型载体的预处理

将步骤（1）所制得的胺基型载体用磷酸缓冲溶液进行处理，处理后，用戊二醛溶液进行活化；

（3）L-天冬酰胺酶酶液的固定化

将游离型的L-天冬酰胺酶酶液加入至磷酸缓冲溶液中溶解，再将步骤（2）中活化过的胺基型载体加至溶有L-天冬酰胺酶酶液的磷酸盐缓冲液中，活化后的胺基型载体占溶解后的L-天冬酰胺酶酶液重量的0.01-0.2倍，在22-50℃下振荡12-72h后过滤，用磷酸缓冲溶液进行冲洗，得到固定化的L-天冬酰胺酶；

制备所述的填装有固定化L-天冬酰胺酶的血液灌流器的方法，具体步骤如下：

1）将固定化L-天冬酰胺酶，进行包膜，净化；

2）将净化后的固定化L-天冬酰胺酶装至两端带有滤网的管内；

3）管两端滤网外部各有一个封头，封头留有可进出液体的接口。

2.根据权利要求1所述的填装有固定化L-天冬酰胺酶的血液灌流器，其特征在于：步骤（1）中所述的环氧型基球是苯乙烯系大孔吸附树脂、丙烯酸系大孔吸附树脂环氧型基球中的一种或两种组合。

3.根据权利要求1所述的填装有固定化L-天冬酰胺酶的血液灌流器，其特征在于：步骤（3）中所述的游离型L-天冬酰胺酶酶液来源于大肠杆菌、黑曲霉、米曲霉、桔青霉、烟曲霉、构巢曲霉、土曲霉、菊欧文氏菌、嗜热栖热菌、胡萝卜软腐欧文氏菌、枯草芽孢杆菌中的一种。

4.根据权利要求1所述的填装有固定化L-天冬酰胺酶的血液灌流器，其特征在于：步骤（3）所述磷酸缓冲溶液的pH为4-10。