[发明专利]一种血清中甾体激素的快速检测方法

权利要求书

1.一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)离心管中依次加入沉淀剂、待测血清或激素混合标准溶液，涡旋振荡；

2)离心管中加入萃取剂萃取，涡旋，离心，收集上清液；

3)将步骤2)中上清液冻干，冻干后进行衍生，激素混合标准溶液衍生时，采用同位素标记的衍生试剂，待测血清衍生时，采用未用同位素标记的衍生试剂；衍生结束后再次冻干；

4)冻干结束后，加入复溶液，盖紧离心管盖子，涡旋，离心，取上清液，得到血清样本的衍生产物或校准品衍生产物；

5)将上述血清样本的衍生产物、校准品衍生产物混合，涡旋混匀后在色谱柱上梯度洗脱分离，进入质谱系统检测；

6)单点定量分析，计算出血清中激素的含量。

2.根据权利要求1所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，步骤1)中沉淀剂为质量体积浓度10％硫酸锌水溶液，沉淀剂与待测血清或激素混合标准溶液的体积比为1:7-10；

步骤2)中萃取液为乙酸乙酯，萃取液体积是待萃取混合液体积的2-3倍。

3.根据权利要求2所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，步骤2)中离心条件为4℃条件下以13000rpm/s速度离心。

4.根据权利要求1所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，同位素标记的衍生试剂为[13C，2H3]-甲氧胺(盐酸盐)吡啶溶液，未用同位素标记的衍生试剂为甲氧胺(盐酸盐)吡啶溶液；质量浓度均为20mg/mL。

5.根据权利要求4所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，步骤3)中衍生方法为向萃取冻干后的离心管内加入浓度为衍生试剂，涡旋，室温超声，37℃下衍生90min。

6.根据权利要求1所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，步骤4)中复溶液为体积浓度30％甲醇/水。

7.根据权利要求1所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，步骤5)中血清样本的衍生产物、校准品衍生产物混合按照体积比为1:1的比例混合。

8.根据权利要求7所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，步骤5)中色谱柱为Agilent Proshell 120EC-C18 3.0×50mm 2.7μm，

梯度洗脱中流动相A为0.1％甲酸/水溶液，流动相B为0.1％甲酸/乙腈溶液。

9.根据权利要求8所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，梯度洗脱条件为流动相B的体积比为：0～1.5min为30％～45％，1.5～2.5min为45％～55％，2.5～3.0min为55％～100％，3.0～4.0min为100％～100％，4.0～4.1min为100％～30％，4.1～4.5min为30％～30％；

流速为0.4ml/mim，柱温为50℃，进样量为7.5μL。

10.根据权利要求1所述的一种血清中甾体激素的快速检测方法，其特征在于，甾体激素包括但不限于睾酮、孕酮、17-α-羟孕酮、11-脱氧皮质醇、皮质酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、孕烯醇酮、脱氧皮质酮、二氢睾酮、雌酮、皮质醇、脱氢表雄酮硫酸酯。