[发明专利]一种用于检测结核分枝杆菌潜伏感染的试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测结核分枝杆菌潜伏感染的试剂盒，其包括免疫层析试纸条和甲基化HBHA，所述免疫层析试纸条包括沿层析方向相互叠加的样品加载区、含有量子点微球标记的抗人IFN‑γ抗体Ⅱ的交联垫及包被有抗人IFN‑γ抗体Ⅰ的检测线和包被有抗抗人IFN‑γ抗体Ⅱ抗体的质量控制线构成的检测区和吸水垫。本发明提供的试剂盒可以用于建立基于量子点标记的结核分枝杆菌潜伏感染的免疫层析检测体系，检测过程简单、快速，检测结果准确、可靠，成本低。本发明的试剂盒可以结合用于对IGRA试验阳性者的离体样品的检测，从而鉴别出活动性结核病患者与潜伏性结核感染者。

技术领域

本发明涉及一种用于检测结核分枝杆菌潜伏感染的试剂盒，属于生物技术应用领域。

背景技术

结核病是一种由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染引起的慢性传染性疾病，通常经呼吸道传播。新感染个体多数不表现典型的临床症状，而处于潜伏性结核感染(latent tuberculosis infection，LTBI)状态。据WHO报道，2018年全球范围内约有17亿人存在LTBI。LTBI人群中只有5％-10％的人会患上活动性结核病(activetuberculosis，ATB)，因而对于结核高负担区域，重视对潜伏性结核感染情况的筛查是十分必要的，其有助于在早期诊断中确定活动性结核病患者，排除其他病因对活动性结核病诊断过程的干扰。

目前，判断是否感染MTB的快速检测手段是检测MTB特异性抗原刺激的免疫学反应。例如，通过结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test，TST)或IFN-γ释放试验(IFN-γrelease assay，IGRA)来诊断；然而，LTBI作为一种MTB在机体内存在，但临床上无明确活动性感染指征的免疫学状态，与ATB一样显示为TST或IGRA试验阳性，因此，无法可靠的区分LTBI与ATB。

结核分枝杆菌肝素结合血凝素(heparin-binding hemagglutinin adhesin，HBHA)是近年来研究发现的一种重要的致病因子。HBHA是一种由结核分枝杆菌表达的糖蛋白，可同时出现在菌体和培养液中。HBHA由199个氨基酸组成，其编码基因Rv0475(ID：886272)全长约600bp，相对分子质量约28kDa。HBHA是一种多功能结合蛋白，它不仅能诱导结核分枝杆菌的聚集、结核分枝杆菌与非吞噬细胞(如上皮细胞)之间的黏附，还能通过与补体C3结合，调理肺泡Ⅱ型上皮细胞对结核分枝杆菌的吞噬，介导结核分枝杆菌侵入肺部的播散环节。HBHA还可以通过抑制细胞自噬过程中LC3，达到抑制巨噬细胞自噬的目的，为结核分枝杆菌在巨噬细胞中长期稳定生存创造了条件；并且，受休眠调节系统的控制，HBHA在休眠结核分枝杆菌中高表达，与结核分枝杆菌潜伏感染密切相关。

HBHA在结核分支杆菌中以甲基化形式存在，这不仅可以保护HBHA蛋白不被水解，而且甲基化HBHA(mHBHA)能诱导机体产生IFN-γ，在机体感染结核过程中发挥重要的保护性免疫作用。而体外将mHBHA作为抗原直接刺激人外周血单个核细胞(PBMCs)，发现LTBI者T淋巴细胞产生IFN-γ(γ-干扰素)的能力明显强于ATB患者和健康对照人群，这使得区分ATB和LTBI成为可能。但是目前，基于LTBI的这一在IFN-γ产生能力上的特征而建立的分枝杆菌潜伏感染检测方法或试剂盒主要面临的问题在于：检测IFN-γ主要采用酶联免疫吸附(ELISA)方法或斑点计数(ELISPOT)等方法，其具有成本高昂、操作步骤多、过程复杂及检测耗时长(3小时以上)等缺点，严重影响了其在结核筛查过程中的广泛应用。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种用于检测结核分枝杆菌潜伏感染的试剂盒。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：