[发明专利]一种食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测试剂盒及方法

说明书

本发明属于生物技术、食品检测领域，具体是一种食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测试剂盒及方法。为建立一种高效、快速、准确且经济的检测方法，本发明公开了一种基于PCR‑DGGE检测食品病原菌致泻大肠埃希氏菌的试剂盒，包括引物组、DNA片段，PCR缓冲液，STE缓冲液。检测方法具体是以化学合成的食品病原菌致泻大肠埃希氏菌的DNA片段作为待测样品的标准参考，当样品条带与标准条带处于相同位置时，即可确定样品中含有食品病原菌致泻大肠埃希氏菌，本发明方法结果可靠，并且实验速度快、特异性好，灵敏度高，并且可以同时分析多个样品。在实验耗材上，价格低，同时实验技术易普及，操作简单。与一般检测方法相比，为一种高效快速经济便捷的检测方法。

技术领域

本发明属于生物技术、食品检测领域，涉及食品病原菌检测相关的凝胶电泳(DGGE)技术，具体是一种食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测试剂盒及方法。

背景技术

致泻性大肠埃希氏菌是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病的常见病原菌，在我国引起感染性腹泻的发病率居所有传染病之首。其抗原结构有3种，即菌体抗原(O抗原)，包膜抗原(K抗原)和鞭毛抗原(H抗原)，O抗原是血清分型的基础，一些特殊的血清型具有病原性，能引起人类腹泻，故称为致泄性大肠杆菌，婴儿腹泻中检出率很高，在成人中亦可成散在或暴发流行。人在感染大肠埃希氏菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。

该菌广泛存在于饮用水，受污染牛奶，肉类食品以及水产品中，如何快速的检测食品中的食品病原菌成为了我们目前一个急需解决的问题。但传统的检测技术试验周期比较长、步骤比较繁琐，在突发公共卫生事件中该技术无法做到高通量快速检测，不能起到有效的监测、预防作用。

发明内容

为建立一种实现高效、快速、准确且经济的食品病原菌致泻大肠埃希氏菌的快速检测方法，本发明公开了一种基于PCR-DGGE检测食品病原菌致泻大肠埃希氏菌的试剂盒和检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

本发明提供一种用于食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测的引物组及DNA片段，所述引物组包括SEQ ID NO：1-6所示的引物；所述DNA片段包括SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：8所示的片段。

进一步，所述引物组及DNA片段是通过化学合成的核苷酸片段。

本发明还提供一种用于食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测的试剂盒，包括上述的引物组和DNA片段，PCR缓冲液，STE缓冲液。

进一步，所述PCR缓冲液包括5μl 10×Easy Taq Buffer，4μl 10mmol/L dNTPs，1μl上游引物，1μl下游引物，1μl Taq酶，1.5μl基因组DNA，36.5μl ddH2O。

进一步，所述STE缓冲液是由0.584g的NaCl、0.12g的Tris和0.37g的EDTA溶解于100ml的双重蒸馏水配制而成的。

本发明还提供一种食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测的方法，包括以下步骤：

步骤1，提取样品微生物基因组总DNA；

步骤2，分别以超纯水、化学合成的DNA片段及样品总DNA为模板进行PCR扩增，超纯水扩增产物作为阴性对照，DNA片段扩增产物作为待测样品的标准；样品PCR扩增产物作为DGGE检测的待测样品；

步骤3，对标准和待测样品进行DGGE检测；