[发明专利]用于检测细胞外囊泡的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种用于检测细胞外囊泡的试剂盒及其应用。所述试剂盒包含AIE荧光染料及量子点；所述AIE荧光染料含有能够与细胞外囊泡膜结合的配偶体；所述量子点偶联有特异性地与所述细胞外囊泡表面的标志物结合的检测剂；所述AIE荧光染料与所述量子点具有配对的发射峰与激发峰，能够实现荧光共振能量转移。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种用于检测细胞外囊泡的试剂盒及其应用。

背景技术

近年来，一些方法已被应用于外泌体液体活检，例如纳米粒子跟踪分析(NTA)、流式细胞术、免疫印迹、PCR分离、胶体金法和酶联免疫吸附法ELSA。由于在癌症早期外周血中肿瘤来源外泌体含量低，传统的定量检测方法灵敏度低。进一步，电化学发光、电化学免疫分析、荧光法和微流控传感器被用于肿瘤外泌体的定量。

Wang等人利用电化学方法开发了一种用于直接捕获外泌体的纳米四面体辅助传感器^[1]。Im等人通过周期性的纳米孔阵列，通过表面等离子体共振检测外泌体，每个柱阵与抗体功能化，以分析外泌体的表面蛋白^[2]。

这些方法可以检测出高灵敏度的外泌体，但是它们需要复杂的界面工程和复杂的纳米制造过程。Jin等人利用荧光法检测外泌体，使用氧化石墨烯纳米薄片吸附单链荧光配体，并形成淬灭纳米探针读出外泌体的存在^[3]。该方法方便，适合临床检测，但这种修饰的荧光染料有限，背景值高，稳定性、灵敏度、信噪比等都有较大限制。例如，人的血清中含有多种荧光物质，在激发光的激发下，正常人的血清荧光发射光谱几乎覆盖整个可见光范围，这种背景荧光对于大多数临床血液或血清样本的检测具有极大的干扰，严重影响检测数据判定。因此，一种能同时标记多个荧光基团，且荧光信号稳定性好、灵敏度高、信噪比高的荧光修饰体系是可取的。

【1】Wang,S.；Zhang,L.；Wan,S.；Cansiz,S.；Cui,C.；Liu,Y.；Wu,Y.ACS Nano2017,11,3943-3949.

【2】Im,H.；Shao,H.；Park,Y.I.；Peterson,V.M.；Castro,C.M.；Weissleder,R.；Lee,H.Nat.Biotechnol.2014,32,490.

【3】Jin,D.；Yang,F.；Zhang,Y.；Liu,L.；Zhou,Y.；Wang,F.；Zhang,G.J.Anal.Chem.2018,90,14402-14411.

发明内容

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明的第一方面涉及一种用于检测细胞外囊泡的试剂盒，包含AIE荧光染料及量子点；

所述AIE荧光染料含有能够与细胞外囊泡膜结合的配偶体；

所述量子点偶联有特异性地与所述细胞外囊泡表面的标志物结合的检测剂；

所述AIE荧光染料与所述量子点具有配对的发射峰与激发峰，能够实现荧光共振能量转移。

本发明的再一方面涉及一种检测细胞外囊泡的方法，包括：

a)将含有细胞外囊泡的组合物与AIE荧光染料、量子点共孵育；

b)在激发光下获取所述AIE荧光染料与所述量子点通过荧光共振能量转移所产生的目标信号；

其中，所述AIE荧光染料、所述量子点、所述细胞外囊泡为如上所定义的AIE荧光染料、量子点和细胞外囊泡。

本发明的有益效果为：