[发明专利]一种麦芽糖结合蛋白、麦芽糖结合蛋白表达载体、重组工程菌及其应用

说明书

本发明提供了一种麦芽糖结合蛋白、麦芽糖结合蛋白表达载体、重组工程菌及其应用，属于麦芽糖结合蛋白制备技术领域。本发明所述麦芽糖结合蛋白表达载体以pMAL‑C2作为原始载体，在malE基因后插入含有终止密码的基因。本发明在所述pMAL‑C2载体malE基因后多酶切位点区插入含有终止密码的基因，能够避免下游LacZα基因的表达，在基于麦芽糖结合蛋白表达载体制备麦芽糖结合蛋白的过程中，无需酶切去除LacZα的工艺，通过亲和层析能够直接获得MBP(43.12KD)，能够简化MBP(43.12KD)的制备过程。

技术领域

本发明涉及麦芽糖结合蛋白制备技术领域，尤其涉及一种麦芽糖结合蛋白、麦芽糖结合蛋白表达载体、重组工程菌及其应用。

背景技术

大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein，MBP)由大肠杆菌malE基因编码，主要负责大肠杆菌的转运及糖代谢。以往被认为无生物学活性或生物学活性较低，在现代分子生物学研究经常作为标签蛋白使用。目前，关于MBP的免疫增强活性的研究越来越受到关注。

现有研究发现，MBP体外可诱导Th1的活化，增强NK细胞的杀伤活性及巨噬细胞的吞噬功能，提示MBP具有免疫增强作用。MBP联合BCG作为疫苗佐剂能够协同诱导Th1的活化，增加IFN-γ的分泌水平，进一步的研究证明，MBP联合BCG在体外可直接作用于CD4+T细胞，涉及的分子机制与TLR2/TLR4/TLR9及其它们之间的信号通路有关。而后续研究显示MBP联合BCG可以通过TLR2和TLR4诱导DC细胞活化和成熟，从而间接促进Th1细胞活化。基于上述研究结果，MBP有可能作为免疫增强剂用于疫苗的研发，而为了进一步研究MBP的免疫效应，需要简单而高效的制备麦芽糖结合蛋白的工艺。

pMAL-C2系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL-C2载体含有编码MBP的大肠杆菌malE基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，从而表达N端带有MBP的融合蛋白。该载体可通过tac强启动子和malE翻译起始信号使克隆基因获得高效表达，并进一步利用MBP对麦芽糖的亲和性达到用Amylose柱对融合蛋白的一步亲和纯化。该载体在malE和多酶切位点之间含有Xa因子酶切位点(IEGRIEF，在R与I间酶切)，在Xa因子酶切位点后插入目的基因片段，可以通过酶切使MBP与目的蛋白得以分离。

pMAL-C2载体含有编码MBP的大肠杆菌malE基因，在不插入目的基因的情况，可用于表达和纯化MBP，但表达的蛋白会带有下游的LacZα序列，需要后续通过Xa因子酶切位点酶切去除LacZα，这一制备过程比较复杂。如在pMAL-C2载体malE基因后多克隆位点插入含终止密码的基因片段，则可避免LacZα基因的表达，从而通过亲和层析直接获得MBP(43.12KD)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种麦芽糖结合蛋白、麦芽糖结合蛋白表达载体、重组工程菌及其应用。利用本发明的麦芽糖结合蛋白表达载体或重组工程菌能够简单、高效的制备得到麦芽糖结合蛋白。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种麦芽糖结合蛋白表达载体，所述麦芽糖结合蛋白表达载体以pMAL-C2作为原始载体，在malE基因后插入含有终止密码的基因。

优选的，所述含有终止密码的基因插入在pMAL-C2上的EcoRⅠ和BamHⅠ位点之间。

本发明还提供了一种包括上述方案所述麦芽糖结合蛋白表达载体的重组工程菌。

本发明还提供了上述方案所述麦芽糖结合蛋白表达载体或者所述重组工程菌在制备麦芽糖结合蛋白中的应用。

本发明还提供了一种基于上述方案所述麦芽糖结合蛋白表达载体或者所述重组工程菌制备得到的麦芽糖结合蛋白。

本发明还提供了一种疫苗免疫增强剂，所述免疫增强剂包括CPG-ODN和上述方案所述麦芽糖结合蛋白。