[发明专利]一种测定天葵子中唐松草酚定含量的方法

说明书

本发明提供了一种测定天葵子中唐松草酚定含量的方法，属于中药有效成分的分析检测技术领域。所述检测方法通过分别制备供试品溶液、对照品溶液，然后取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，以乙腈‑0.2%甲酸水溶液为流动相，进行脱洗。本方法操作简便、稳定性高、重复性好、专属性强，并具有供试品制备简单、设备要求较低、实验操作安全、稳定性高、重复性好、专属性强以及操作简便等优势，为后续天葵子中唐松草酚定的定性、定量的研究等提供产品质量控制、评价指标提供可靠的检测方法。

技术领域

本发明涉及一种中药材中有效成分含量的测定方法，尤其涉及一种测定天葵子中唐松草酚定含量的方法，属于中药有效成分的分析检测技术领域。

背景技术

天葵子，为毛萇科植物天葵的干燥块根。夏初采挖，洗净，干燥，除去须根，能清热解毒，消肿散结。用于痈肿疔疮，乳痈，凜病，蛇虫咬伤。文献“天葵子化学成分和抗肿瘤活性的初步研究，关频等，2011”文献中提到：天葵子生物碱中的季铵碱可能是抗肿瘤活性成分；文献“天葵子总生物碱对小鼠 S180 实体瘤的抑制作用及对肿瘤炎性微环境干预作用研究，孙健等，2020”中提到：天葵子总生物碱可以抑制肿瘤生长，并且对小鼠胸腺及脾脏的影响较小，并进一步的体外实验表明，天葵子总生物碱可以调控肿瘤微环境中多种肿瘤相关炎性因子的表达；文献“一种含天葵子的预防肿瘤的中药粉剂，CN107308237A”中公开：含有蜂王浆、天葵子、白花蛇舌草、半枝莲、石上柏的中药粉剂具有预防肿瘤的作用。此外，现代药理研究表明天葵子适用于肺癌、鼻咽癌、膀胱癌、肠癌、肾癌、前列腺癌及恶性淋巴肿瘤。

唐松草酚定为季铵型生物碱，由此可见天葵子中唐松草酚定可能具有抗肿瘤的作用，因此，对唐松草酚定的研究同样意义重大。

2015版《中国药典》中天葵子项下均未涉及唐松草酚定，且目前也未有论文、专利等文献公开过关于天葵子中唐松草酚定的含量测定方法。文献“中药天葵子化学成分研究（Ⅱ），蓝华英，2006”中，主要公开：天葵子药材的化学成分分析，以及鉴定出天葵子中含有唐松草酚定的有效成分等。

发明内容

本发明旨在解决现有技术问题，而提出了一种测定天葵子中唐松草酚定含量的方法。在本技术方案中，通过有机溶剂提取有效成分作为供试品溶液，与对照品溶液一并进入高效液相色谱仪中进行测定，可实现天葵子中唐松草酚定的定性和定量检测（检测限可达到0.44μg/mL），为后续天葵子中唐松草酚定的定性、定量的研究，以及为产品质量控制、评价指标提供可靠的检测方法；且本方法提供的方法操作简便、稳定性高、重复性好及专属性强。

为了实现上述技术目的，提出如下的技术方案：

一种测定天葵子中唐松草酚定含量的方法，包括如下步骤：

A．对照品溶液的制备：取对照品唐松草酚定，加甲醇溶解，按浓度呈梯度分布配制对照品溶液；

B．供试品溶液的制备：取天葵子粉末5～10g，加入95%乙醇100～150mL溶解，电热套加热回流3～4h，放冷后离心（离心转速为2000～3000rpm）；取上清液浓缩至干，残渣加水30～50mL超声分散，用等体积乙酸乙酯萃取2～4次，弃去乙酸乙酯相，水相用等体积正丁醇萃取2～4次，合并正丁醇相，浓缩至干，残渣加甲醇溶解并定容至5～10mL容量瓶中，为供试品溶液；

C．标准曲线的绘制：取所得对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪中进行测定，记录对应的色谱图和峰面积；

以对照品溶液的浓度为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，计算得线性回归方程；

D．结果计算：取所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，将所得峰面积带入所述标准曲线的线性回归方程中，即得供试品天葵子中唐松草酚定的含量；

高效液相色谱仪内色谱条件满足：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm；