[发明专利]一种快速鉴定辣椒果实果色发育相关基因功能的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定辣椒果实果色发育相关基因功能的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、冰上操作，将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirD1、VirD2、VirE2浓度分别调整至100μg/μL；

S2、用限制性内切酶酶切果实果色发育相关DNA后连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA；

S3、将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，获取外源质粒DNA的浓度为1 μg/μL的混合液A；

S4、取步骤S1所得溶液中的一种或几种共2μL，依次加入8μL混合液A，6μL脂质体混合后，加入30μL的缓冲液中，4℃静置2小时后，备用；

S5、辣椒盛花坐果期，通过花粉管通道法将目的基因导入辣椒植株；

S6、设置正常对照组，观察并记录辣椒果实果色的表型变化，基于辣椒果实果色的表型变化判定对应的果实果色发育相关基因的功能。

2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定辣椒果实果色发育相关基因功能的方法，其特征在于，所述缓冲液包含5-15mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸，0.4-0.6mmol/L二氨基乙烷四乙酸，1-10mmol/L氯化钙、0.015μg·μL^-1-0.055μg·μL^-1甲基磺酸乙酯。

3.根据权利要求1所述的一种快速鉴定辣椒果实果色发育相关基因功能的方法，其特征在于，质粒DNA保护剂由介孔二氧化硅、磷酸钙保护剂按体积比10：1的比例混合所得。

4.根据权利要求1所述的一种快速鉴定辣椒果实果色发育相关基因功能的方法，其特征在于，限制性内切酶为限制性内切酶Hind Ⅲ .+EcoR Ⅰ酶。

5.根据权利要求1所述的一种快速鉴定辣椒果实果色发育相关基因功能的方法，其特征在于，实验组果色与对照组存在明显差异的，则说明被检测基因与辣椒果实果色发育相关；相反，果实果色与对照相比没有明显差异的，则说明被检测基因与辣椒果实果色发育无关，或是无功能基因。