[发明专利]一种多年生木本植物氮效率田间有效测定方法

权利要求书

1.一种多年生木本植物氮效率田间有效测定方法，其特征在于包括以下步骤：

1）空白对照样品采集：对多年生木本植物进行顶端成熟叶片收集，分别设置3个生物学重复，每个生物学重复3-5株植物，每株植物选取10片顶端成熟叶片；

2）处理设置：设置0.05、0.2、0.5、2、5mM5个氮浓度梯度，采用50%丰度的¹⁵N同位素标记的尿素；

3）¹⁵N同位素标记过程：每株植物分别用500mL上述5个氮浓度梯度的50%丰度¹⁵N同位素标记的尿素沿基部一圈缓慢浇灌；

4）样品采集：一周后采集每株植物顶端成熟叶片，每株植物采集10片；

5）样品制备：对步骤2）采集的空白对照样品叶片和步骤4）采集的样品叶片分别用纯水洗干净，冷冻干燥后，用粉碎机磨碎，放置于干燥皿中保存，待测；

6）样品检测：采用C/N元素分析仪经连续流接口装置与同位素质谱分析仪连接测定步骤5）所述样品50%丰度的¹⁵N丰度和全氮含量，用IAEA-N-1标准物质对实验室钢瓶N₂进行标定，氮同位素以大气氮为参考标准；

7）根据步骤6）的测定数据，计算植物的氮效率，

公式如下：NE=[(TN%·Atom%)_Treatment-(TN%·Atom%)_Blank]·100/15，

其中：NE为氮效率，TN%为植株全氮含量，Atom%为¹⁵N原子百分比，(TN%·Atom%)_Treatment为不同¹⁵N浓度处理的植株¹⁵N含量，(TN%·Atom%)_Blank为未加¹⁵N标记前空白对照的植株¹⁵N含量；

8）采用Origin或SigmaPlot对植物氮效率关系式进行非线性拟合，得到拟合公式：

NE=NE_a·C/（A＋C），NE_b= NE_a/A，

其中：NE为氮效率，NE_a为高氮条件下的氮效率潜力，C为氮浓度，A为常数，NE_b为低氮条件下的氮效率潜力。

2.如权利要求1所述的一种多年生木本植物氮效率田间有效测定方法，其特征在于所述步骤1）中多年生木本植物为田间成林后的木本植物。

3.如权利要求1或2所述的一种多年生木本植物氮效率田间有效测定方法，其特征在于所述多年生木本植物为茶树品种。

4.如权利要求1所述的一种多年生木本植物氮效率田间有效测定方法，其特征在于选取氮高效品种作为对照品种进行所述步骤1）-8）氮效率测定，测定结果与样品植物的氮效率对比，评价样品植物的氮效率水平。

5.如权利要求4所述的一种多年生木本植物氮效率田间有效测定方法，其特征在于所述氮高效品种植物为福鼎大白、龙井3。