[发明专利]一种细胞冻存液和用于间充质干细胞的冷冻方法及其应用

权利要求书

1.一种细胞冻存液，其特征在于，按体积百分数计，所述细胞冻存液包括以下组分：

二甲基亚砜溶液 1%～10%，羟乙基淀粉氯化钠溶液 1%～10%，人血白蛋白溶液5%～20%，葡萄糖溶液 2%～20%，右旋糖酐40氯化钠溶液5%～20%，非必须氨基酸溶液 0.1～1%，剩余为Hank's平衡盐溶液，以上总和为100%。

2.如权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述Hank's平衡盐溶液包括CaCl₂140mg/L，MgCl₂•6H₂O 100mg/L，MgSO₄•7H₂O 100mg/L，NaHCO₃ 350mg/L，D-葡萄糖1000mg/L。

3.如权利要求2所述的细胞冻存液，其特征在于，所述Hank's平衡盐溶液PH值为7.2~7.4。

4.如权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，按体积百分数计，所述细胞冻存液包括以下组分：二甲基亚砜溶液 5%～8%，羟乙基淀粉氯化钠溶液 5%～8%，人血白蛋白溶液10%～15%，葡萄糖溶液5%～10%，右旋糖酐40氯化钠溶液5%～10%，非必须氨基酸溶液 0.5～1%，剩余为Hank's平衡盐溶液，以上总和为100%。

5.如权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述二甲基亚砜溶液中二甲基亚砜的质量浓度＞99%，羟乙基淀粉氯化钠溶液中羟乙基淀粉的质量浓度为6%，人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量浓度为20%，葡萄糖溶液中葡萄糖的质量浓度为10%，右旋糖酐40氯化钠溶液中右旋糖酐40的质量浓度为6%，非必需氨基酸溶液浓度为100×溶液。

6.一种细胞冻存液用于间充质干细胞的冷冻方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、按照权利要求1的各组分配比配制细胞冻存液；

S2、取贴壁培养融合完全的间充质干细胞，消化、离心收集细胞；

S3、弃去离心上清，将步骤S1的细胞冻存液重悬细胞并调整细胞密度至（2~6）×10⁶/ml，将细胞分装于冻存管中冻存；

S4、采用程序降温仪间充质干细胞冻存程序将细胞降温至-90.0℃，后转移并长期存储于液氮中。

7.如权利要求6所述的细胞冻存液用于间充质干细胞的冷冻方法，其特征在于，所述步骤S4的程序降温仪间充质干细胞冻存程序具体为:

4.0℃维持5min；

以1.0℃/min降温至﹣4.0℃；

以25.0℃/min迅速降温至﹣40.0℃；

以10.0℃/min升温至﹣12.0℃；

以1.0℃/min降温至﹣40.0℃；

以10.0℃/min降温至﹣90.0℃；

结束。

8.一种如权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液在制备细胞制剂中的应用。

9.一种如权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液在制备细胞制剂中的应用，其特征在于，所述细胞制剂包括权利要求1-4任一项所述细胞冻存液和间充质干细胞，所述间充质干细胞的密度（2~6）×10⁶个/mL。

10.一种如权利要求1-4任一项所述的细胞冻存液在制备间充质干细胞药物中的应用。