[发明专利]一种化学诱导皮质神经元的方法及培养基有效
申请号: | 202011562592.8 | 申请日: | 2020-12-25 |
公开(公告)号: | CN112553160B | 公开(公告)日: | 2023-10-27 |
发明(设计)人: | 魏君;蔡萌;云轩 | 申请(专利权)人: | 武汉睿健医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/079 | 分类号: | C12N5/079;C12N5/0797 |
代理公司: | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人: | 张莹 |
地址: | 430000 湖北省武汉市东湖新技术*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 化学 诱导 皮质 神经元 方法 培养基 | ||
1.分泌酶抑制剂Crenigacestat在诱导神经干细胞分化为皮质神经元细胞中的应用。
2.权利要求1所述的应用,其特征在于,所述抑制剂Crenigacestat的用量为1-20μM。
3.权利要求1所述的应用,其特征在于,所述抑制剂Crenigacestat的用量为7.5μM。
4.一种皮质神经元诱导培养基,其特征在于,包括无血清基础培养基和抑制剂Crenigacestat,抑制剂Crenigacestat的用量为1-20μM。
5.根据权利要求4所述的培养基,其特征在于,所述抑制剂Crenigacestat的用量为7.5μM。
6.根据权利要求4所述的培养基,其特征在于,所述无血清基础培养基包括维生素、无机盐、小分子抑制剂、血清替代物以及其他成分;
所述维生素包括1ug/ml维生素E,1.2uM维生素B12,64mg/L维生素C;
所述无机盐包括1.2g/L碳酸氢钠,0.5g/L氯化钠,13.6μg/L亚硒酸钠;
所述小分子抑制剂包括12.5uM LY2157299,5uM JW55;
所述其他成分包括12.5ug/ml D(+)-半乳糖,6.3ng/ml黄体酮,23ug/ml腐胺,20mg/L胰岛素;
所述血清替代物为血清白蛋白、转铁蛋白及脂肪酸中的一种或多种,用量为100ng/ml。
7.如权利要求4所述的培养基诱导多能干细胞分化为皮质神经元细胞的方法,包括以下步骤:
S1.多能干细胞诱导分化神经干细胞:在无血清基础培养基中对多能干细胞进行单层贴壁培养,诱导培养基贴壁培养,得到形成神经花环状均匀排列的神经干细胞;
S2.神经干细胞诱导分化皮质神经元:将S1所得神经干细胞通过皮质神经元诱导培养基诱导分化得到皮质神经元。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述贴壁培养中有基底膜制剂,为基底胶,层粘蛋白和玻连蛋白的一种或多种。
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述步骤S1还包括鉴定神经干细胞标志物Nestin、ZO-1、SOX2、PAX6及Nestin以验证神经干细胞的诱导结果。
10.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述步骤S2还包括鉴定皮质神经元表达基因GAD1、GRID1、GRIN1、VGLUT1及VGLUT2以验证皮质神经元的诱导分化结果。
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