[发明专利]检测血清THBS2表达的肝病纤维化检测试剂、检测试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了THBS2作为一种肝病纤维化进展的生物标志物，以及一种肝病纤维化的双抗体夹心法ELISA诊断试剂。血清THBS2定量检测，可以对各类肝病的纤维化程度作出快速的辅助诊断，具有重要的临床预后应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及一种用于肝病纤维化诊断的双抗体夹心ELISA检测方法及试剂

背景技术

肝病包括酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、急/慢性病毒性肝病、自身免疫性肝病、药物/毒物性肝病、胆汁淤积性肝炎及遗传性肝病等。肝病的重症化倾向常以肝病的反复炎症性过程，随后纤维化的不断进展为表征。肝病纤维化晚期可发展至终末期肝病如肝硬化甚至肝癌。当前对终末期肝病的治疗并不乐观，早期诊断、干预对肝病的治疗及预后尤为关键。

当前对肝纤维化的判断通常基于三角度。1)病理检查。肝组织病理活检仍是评价肝病程度的金标准，但属于有创性方法。2)血清学检查。肝纤维化四项如血清III型前胶原氨基端肽(PIIINP)、IV胶原(CIV)、层连蛋白(LN)、透明质酸(HA)已在临床常规开展，但存在特异性、敏感性不足的缺陷。3)影像学检查。影像学技术可用于诊断肝硬化、肝肿瘤，但对慢性肝病存在早期预警程度差、成本较高的缺点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有肝病纤维化诊断技术的缺陷和不足，提供了一种新的肝病纤维化诊断标志物，即血小板反应蛋白2(Thrombospondin 2,THBS2)基因。THBS2是凝血酶敏感素家族成员之一，广泛分布于上皮来源组织中的细胞外基质。

本发明人通过检测正常人和肝病患者血清中THBS2的含量，统计学分析肝病患者THBS2的表达显著增高。对于肝病纤维化显著期患者的检测发现，血清THBS2的表达水平随纤维化分期程度而递增；且肝病纤维化显著期患者较不显著患者THBS2的表达显著上升。因此，THBS2是肝脏纤维化一个较好的检测指标，特别是对于肝病纤维化进展的早期预警和诊断，为该疾病的临床早期诊治找到一种新的生物标记物。

本发明的第一个目的是提供血清THBS2在作为肝病纤维化诊断标志物方面的应用。

本发明第二个目的是提供了一种检测THBS2表达的肝病纤维化检测试剂盒，包括THBS2捕获抗体和用于标记的THBS2酶标抗体。

具体的，所述THBS2捕获抗体和用于标记的THBS2酶标抗体为人THBS2重组单克隆抗体

更进一步的，THBS2捕获抗体用于包被酶标板，辣根过氧化物酶标记于THBS2酶标抗体。

具体的，所述试剂盒包括THBS2捕获抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶(HRP)标记的THBS2酶标抗体、THBS2标准品、和辅助试剂组成。

更具体的，所述试剂盒包括如下组分：(1)酶标板：在固相96孔酶标板上包被有人THBS2重组单克隆抗体；(2)酶结合物工作液：辣根过氧化物酶标记的人THBS2重组单克隆抗体反应液；(3)显色液；(4)洗涤液；(5)结合物稀释液；(6)终止液。

所述试剂盒还包括标准品。

优选地，所述试剂盒可作为肝病诊断试剂盒和早期预警诊断试剂盒。

本发明的第三个目的是提供了诊断肝病纤维化的检测试剂，包括与THBS2特异性结合的抗体。

进一步的，所述THBS2特异性抗体为人THBS2重组单克隆抗体。

具体的，所述抗体包括THBS2捕获抗体和用于标记的THBS2酶标抗体。

所述包被酶标板的THBS2捕获抗体和HRP标记的THBS2酶标抗体为配对抗体

本发明还提供了一种血清THBS2的双抗体夹心法ELISA检测方法，利用上述试剂盒进行双抗体夹心法ELISA检测。