[发明专利]polyG底物特异性的褐藻胶裂解酶FaAly7及其应用

说明书

本发明公开了一种褐藻胶裂解酶FaAly7，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码褐藻胶裂解酶FaAly7的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。一种降解褐藻胶/制备褐藻寡糖的方法：采用褐藻胶裂解酶FaAly7降解褐藻胶。本发明还公开了包含褐藻胶裂解酶FaAly7基因的重组表达载体和重组宿主。本发明的褐藻胶裂解酶FaAly7，属于PL7家族，能够降解海藻酸钠和polyG，具有较明显的底物特异性(海藻酸钠＝100％，polyG＝312％)。降解polyG产生不饱和2‑8糖，酶解主要产物为不饱和2‑4糖，具有良好的生物催化效率。

技术领域

本发明涉及一种polyG底物特异性的褐藻胶裂解酶FaAly7及其酶制剂与应用，属于功能酶技术领域。

背景技术

褐藻寡糖是褐藻胶降解的产物，聚合度(DP)一般在2～25之间，其分子质量低，水溶性好，具有许多生理活性，如免疫调节、抗菌、抗氧化、抗高血压、抗糖尿病、抗肿瘤、抗凝血、促进植物细胞生长等活性，这使得褐藻寡糖在医药、保健品、食品、农业等领域有了很大的应用价值。寡糖的M/G比例、分子量、单体分布、末端是否有双键等均会影响它的生物活性，因而可控地制备具有特定结构的褐藻寡糖具有重要意义。

目前,褐藻寡糖的制备方法主要有化学法、物理法、生物酶法。化学法、物理法制备褐藻寡糖存在反应条件剧烈难控制、环境污染大、对寡糖结构有破坏等缺点。生物酶法是用特异性或非特异性的褐藻胶裂解酶降解褐藻胶制备寡糖，其具有反应条件温和、反应过程容易控制且产物纯度较高、获得的寡糖具有不饱和双键、具备更好生物活性等优点。底物特异性褐藻胶裂解酶可以特异性地切割特定的糖苷键，可控地产生一定结构的褐藻寡糖，但野生型菌株产酶水平低，难以满足工业生产和应用的要求，可采用异源表达提高产酶水平，制备酶制剂，用于工业化生产。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种polyG底物特异性的褐藻胶裂解酶，可以应用该酶降解polyG产生褐藻寡糖。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种褐藻胶裂解酶FaAly7，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

MIINYKTLLQFFTAFIILFNLNNPLWAQKIPSDLMDNCLQWKITYPTGQEEKQLCDEPNNEYFFVNETEDAIVFRTPIRLDNGTTPNSDNIRSELREREADGSVDIYWTTEGSHMLYVEQAITHLPINKPELVASQIHGNKEAGIDDSMVMRLEESHLFLSFNGGKLRKNITIKEDYVLGTKHEVIFLVVNGKHYCYYAEDGKLLEAYNNNDASQYLIRDIENDNDYVMDLNYEDSYFKVGNYTQSNSKEEGYDVNNPENYGEVLVYDFTVVHDEVLVSGVTLTPSHVNLSIGGPFQLTKTITPANATNKSVTYTSSNTAVVEVNENGVLTGIAEGSATVTATTVEGGFTDTITVDVVGNPVGDNLALNKPVTGTGTHDADNVVENLVDGSTSTRWSVSGFPQTAIIDLGQQYSLHRSEVVCYTDRAYQYSIAVSDTENGTYTEIVDRTENVTPGDAANPIVDLFSAVDGRFIKLTVTGAAVYDGPWVSLSEFRIYGESSLSIDDNTSDVTNITLSPNPTSDIVNISGAEMYNTLQVYDQLGKLVMQRTITDGAINISHLSSGLYIFRLSGASQSINKRVIKK。

一种编码上述褐藻胶裂解酶FaAly7的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：