[发明专利]一种细胞膜片的制备方法及应用

权利要求书

1.一种细胞膜片的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

S1，在医用敷料上涂覆硅胶溶液，静置、凝固得到硅胶膜，然后进行亲水改性处理；

S2，表皮干细胞分离培养；

S21，取术后皮肤消化、分离，去真皮组织保留表皮组织；

S22，将表皮组织粉碎、消化、过滤、离心，收集细胞；

S23，以K-SFM或Epilife培养液调整细胞浓度为(1～2)×10⁶个细胞/25cm²，接种于采用Ⅳ型胶原包被处理的培养瓶中，常规培养得到表皮干细胞；

S3，取S2中培养对数期的表皮干细胞消化、收集，调整浓度为0.2~0.5×10⁶个细胞/ml，加入到带有硅胶膜的医用敷料上，在温度为37℃、5%的CO₂的条件下培养制得细胞膜片。

2.根据权利要求1所述的细胞膜片的制备方法，其特征在于：所述S1中的硅胶溶液为A型硅胶和B型硅胶的混合溶液，该混合溶液中A型硅胶和B型硅胶的重量比为1：1。

3.根据权利要求1或2所述的细胞膜片的制备方法，其特征在于：所述S1中采用等离子体对医用敷料表面的硅胶膜进行亲水改性处理。

4.根据权利要求1或2所述的细胞膜片的制备方法，其特征在于，所述S22的粉碎、消化、过滤、离心具体为：将表皮组织剪碎，在温度为37℃的条件下用浓度为0.25~0.5%（W/V）的胰蛋白酶溶液消化10~15min，采用含血清1640培养基终止消化，再用200目筛网过滤，然后在转速为800~1000rpm的条件下离心4~8min。

5.根据权利要求1或2所述的细胞膜片的制备方法，其特征在于，所述S23具体为：以K-SFM或Epilife培养液调整细胞浓度为(1～2)×10⁶个细胞/25cm²，接种于采用Ⅳ型胶原包被处理的培养瓶中，常规培养10~15min，吸弃未贴壁细胞；再采用PBS溶液轻洗两次，更换新的K-SFM或Epilife培养液进行常规培养，次日换液，然后每隔三天换液一次。