[发明专利]一种重齿当归ISSR-PCR分子标记及其应用

说明书

本发明公开一种重齿当归ISSR‑PCR分子标记及其应用，属于分子标记技术领域。通过对UBC81、UBC807、UBC810、UBC816、UBC817、UBC819引物的反应体系进行优化，可快速准确扩增出目的条带，此体反应系准确可靠、操简单、节约时间和成本及扩增条带清晰稳定。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种重齿当归ISSR-PCR分子标记及其应用。

背景技术

重齿当归是伞形科当归属多年生草本药用植物，具祛风除湿、通痹止痛之功效，是我国传统中药材之一。重齿当归在湖北、重庆、甘肃、陕西均有人工种植。目前。关于重齿当归的研究主要集中在其活性成分、临床疗效、栽培技术等方面，而缺乏关于其分子标记的研究。

分子标记技术能从DNA水平上反映物种的遗传差异，是研究遗传多样性的有效方法。近年来，ISSR分子标记技术因其操作简单、多态性高、重复性好等优点被广泛应用于动植物的品种鉴定等。但ISSR标记是一种随机性标记方法，不同物种甚至同一物种不同条件下其试验参数均有差异，因此建立一个科学合理的ISSR-PCR反应体系，探寻最佳的PCR各组分的用量，可为后续开展重齿当归的遗传多样性研究及良种选育等工作提供理论依据。

因此，如何提供一种重齿当归ISSR-PCR分子标记及其应用是本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明针对现有针对重齿当归的研究缺乏关于其分子标记研究的问题，提供了一种重齿当归ISSR-PCR分子标记及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种重齿当归ISSR-PCR引物，序列如下：

UBC812：GAGAGAGAGAGAGAGAA，SEQ ID NO.1；

UBC807：AGAGAGAGAGAGAGAGT，SEQ ID NO.2；

UBC810：GAGAGAGAGAGAGAGAT，SEQ ID NO.3；

UBC816：CACACACACACACACAT，SEQ ID NO.4；

UBC817：CACACACACACACACAA，SEQ ID NO.5；

UBC819：GTGTGTGTGTGTGTGTA，SEQ ID NO.6；

反应体系为20μL，其中含有2×TaqMasterMix 9.8μL，模板DNA 9.04ng，引物0.325μM，其余为H₂O；

优选的，使用的试剂盒为北京天恩泽基因科技有限公司，天净沙系列，即用型PCR试剂盒3.0；

扩增程序为：94℃预变性4min；94℃变性1min；53.9℃退火40s；72℃延伸40s，循环40次；72℃延伸5min，最后保存于4℃；

一种重齿当归ISSR-PCR的鉴定方法，其特征在于，步骤如下：

1)采集重齿当归的嫩叶，提取植物组DNA；

2)采用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA；

3)采用上述ISSR-PCR引物，通过上述ISSR-PCR反应体系对步骤1)提取的DNA样品进行扩增。

综上所述，本发明提供了一种重齿当归ISSR-PCR分子标记及其应用。与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

本发明通过6种重齿当归的ISSR-PCR分子标记用引物进行优化，建立并优化了重齿当归的ISSR-PCR分子标记反应体系，该方法准确可靠、操作简单、节约时间和成本，扩增条带清晰稳定，易于快速分析检测。