[发明专利]一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法及应用在审
| 申请号： | 202011563981.2 | 申请日： | 2020-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN112592862A | 公开（公告）日： | 2021-04-02 |
| 发明（设计）人： | 李季;丁国春;陈彦廷 | 申请（专利权）人： | 中农新科（苏州）有机循环研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C05F17/20;C12R1/13;C12R1/01 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 215100 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 发酵 复合 微生物 制备 方法 应用 | ||
1.一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、提供菌种原料和培养基：所述菌种原料包括短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌，所述培养基包括LB琼脂培养基和LB液体培养基；
S2、斜面培养：无菌下，将短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌接种于LB琼脂培养基中培养；
S3、一级种子培养液：无菌下，将S2培养得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌单菌落接种于LB液体培养基中培养，制得一级种子液；
S4、二级种子培养液：无菌下，将S3所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌一级种子液接种于LB液体培养基中培养，制得二级种子液；
S5、混合发酵培养液：将S4所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌二级种子液等数量级混合接种于LB液体培养基进行混合培养，得到混合发酵培养液。
2.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述短短芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.21234。
3.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述枝芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.21233。
4.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：
S1中所述LB琼脂培养基制备方法为：称取试剂胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，琼脂粉15～20g，加入1000ml去离子水搅拌至溶质溶解，用5mol/L NaOH调节PH至7.0，用去离子水定容至1L，在高压下121℃蒸汽灭菌20min；
所述LB液体培养基制备方法为：称取试剂胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，加入1000ml去离子水搅拌至溶质溶解，用5mol/L NaOH调节PH至7.0，用去离子水定容至1L，在高压下121℃蒸汽灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S2中在28-32℃下培养1-2天。
6.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S3中短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌单菌落接种于LB液体培养基后，在28-32℃条件下，180-200r/min摇床培养1～2天，当菌种液体培养OD值达到3.0以上时停止培养。
7.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S4中短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌一级种子液接种于LB液体培养基中，接种量为4-6％。在28-32℃条件下，180-200r/min摇床培养1～2天，当菌种液体培养OD值达到3.0以上时停止培养。
8.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S5中短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌二级种子液接种于LB液体培养基进行混合培养，接种量为2-3％在28-32℃条件下，180-200r/min摇床培养1～2天。
9.一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的应用，其特征在于：将权利要求1制备的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂应用于高盐餐厨垃圾的处理。
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