[发明专利]一种斑马鱼肥胖模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种斑马鱼肥胖模型的构建方法，包括：将斑马鱼雌雄成鱼置于交配盒，交配后收卵，将健康的卵恒温培养孵化，受精后挑选健康斑马鱼幼鱼；BPA和DEHP以丙酮助溶配成混合水溶液，用于饲养所述斑马鱼幼鱼；孵化后起投喂熟鸡蛋黄，直至受精后第21天，斑马鱼肥胖模型建成。本发明构建的斑马肥胖模型的方法具有时间短、经济性好、效率高等优点，可为环境内分泌干扰物的毒性评估和机制研究，以及治疗药物筛选等方向提供方便、快捷、高效的研究工具。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种斑马鱼肥胖模型的构建方法。

背景技术

肥胖是一种由遗传因素、环境因素等多种原因相互作用而引起的慢性代谢性疾病，其发生机理是能量摄入超过消耗，导致体内脂肪过度蓄积和体重超过理想20％以上。目前，肥胖已经成为全球患病数量最多的慢性疾病之一。

动物模型是研究肥胖的一种不可或缺的手段及方法，受到越来越广泛的关注。采用斑马鱼替代传统的大小鼠的造模方法，符合动物保护原则，存在降低造模成本、缩短造模周期、对药物反应敏感等诸多优势，一直是学界研究是对象。

公开号为CN 109906979 A的专利说明书公开了一种斑马鱼高胆固醇模型建立的方法包括如下步骤：S1、斑马雌雄成鱼以1:2～2:3的比例置于交配盒，交配后收卵，将健康的卵在28℃恒温培养，5天后显微镜下挑选健康斑马鱼幼鱼；S2、在蛋黄粉中添加胆固醇制作高胆固醇饲料，将不添加胆固醇的蛋黄粉作为普通饲料，用于饲养所述健康斑马鱼幼鱼；S3、将斑马鱼幼鱼用高胆固醇饲料连续培养后，同时用普通饲料喂养的斑马鱼幼鱼作为对照组，斑马鱼血管胆固醇积累量显著性高于对照组时，斑马鱼高胆固醇模型建成。该专利技术采用乙醚为助溶剂，且没有造模动物生存率测试。

浙江大学徐剑2018年硕士论文进行了《环境内分泌干扰物诱导肥胖的斑马鱼模型研究》，其公开了致肥物BPA(双酚A)、DEHP(邻苯二甲酸二异辛酯)分别在50μg/L、100μg/L浓度，对受精后7-30天的斑马鱼幼鱼持续暴露，可引起斑马鱼脂代谢异常，BPA中、高剂量组BMI中、高剂量组高脂率分别为81％、84％，DEHP中、高剂量组高脂率分别为83％、89％；该研究中斑马鱼幼鱼的存活率最高仅83％，且死亡原因不清楚是药物原因还是自身原因。

成功率高的斑马鱼造模主要采用特殊食物诱导和单一化学物诱导，均存在时间长、效果差、死亡率高等弊端。

BPA和DEHP普遍应用于塑料工业，是全球最普遍的污染物之一，是两种有致肥作用的环境内分泌干扰物，具有明确的生殖毒性。本发明联合使用两种化学物质和膳食诱导，效果好、死亡率低、可操作性强，尚无报道应用。

发明内容

针对上述技术问题以及本领域存在的不足之处，本发明提供了一种斑马鱼肥胖模型的构建方法，成模率高、造模周期短、可操作性强。

一种斑马鱼肥胖模型的构建方法，包括：将斑马鱼雌雄成鱼置于交配盒，交配后收卵，将健康的卵恒温培养孵化，受精后挑选健康斑马鱼幼鱼；BPA和DEHP以丙酮助溶配成混合水溶液，用于饲养所述斑马鱼幼鱼；孵化后起投喂熟鸡蛋黄，直至受精后第21天，斑马鱼肥胖模型建成。

本发明通过联合化学物诱导、优选助溶剂等方式协同作用，缩短了造模时间、降低了模型动物的死亡率，并且效果也更为显著。

所述的斑马鱼肥胖模型的构建方法，优选采用AB品系斑马鱼雌雄成鱼。

作为优选，所述雌雄成鱼中雄、雌比例为2:1。其有益效果是雌鱼受精比例高。

所述的斑马鱼肥胖模型的构建方法，优选受精后第5-7天挑选健康斑马鱼幼鱼。其有益效果是增加斑马鱼的存活率。