[发明专利]一种银龙鱼性别鉴定SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种银龙鱼性别鉴定SNP分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQID NO.1所示，其中该序列第66位为T或C，第102位为A或T，第119位为T或C，第229位为C或G。

2.根据权利要求1所述的银龙鱼性别鉴定SNP分子标记，其特征在于，当第66位碱基为T/T时，样品为雄性，为T/C杂合时，样品为雌性；当第102位碱基为A/A时，样品为雄性，为T/A杂合时，样品为雌性；当第119位碱基为T/T时，样品为雄性，为T/C杂合时，样品为雌性；当第229位碱基为C/C时，样品为雄性，为C/G杂合时，样品为雌性。

3.一种用于鉴定或辅助鉴定银龙鱼性别的引物对，其特征在于，包括上游引物F和下游引物R，所述上游引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述下游引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一种用于鉴定或辅助鉴定银龙鱼性别的试剂盒，其特征在于，含有权利要求3所述的引物对、dNTP以及DNA聚合酶。

5.一种银龙鱼性别鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测银龙鱼的基因组DNA；

（2）以待测银龙鱼的基因组DNA为模板，利用权利要求3所述上游引物F和下游引物R，进行PCR扩增反应；

（3）反应完成后进行分析，确定样品基因型，鉴定性别。

6.根据权利要求5所述的银龙鱼性别鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中PCR扩增反应时采用的反应体系为40μl，包括2*TaqMasterMix(Dye) 20μl、PrimerF 1.6μl、PrimerR 1.6μl、ddH₂O15.8μl、基因组DNA 1μl。

7.根据权利要求5所述的银龙鱼性别鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中PCR扩增反应时PCR扩增程序为：94℃ 2min；然后进行35个循环，包括94℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 30s；然后72℃保持5min结束。

8.根据权利要求5所述的银龙鱼性别鉴定方法，其特征在于，步骤（3）中结合Sanger测序进行分析，确定样品基因型，鉴定性别。

9.权利要求1~2任一项所述用于银龙鱼性别鉴定的SNP分子标记、权利要求3所述引物对、权利要求4所述试剂盒和/或权利要求5~8任一项所述方法在银龙鱼性别鉴定和/或银龙鱼养殖中的应用。