[发明专利]增强正调控蛋白基因表达以提高阿卡波糖发酵水平的方法

权利要求书

1.一种提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，在游动放线菌QQ-2中强化表达阿卡波糖生物合成基因簇转录控调相关的序列如SEQ ID NO.1所示的正调控蛋白基因ACPL_1889，获得阿卡波糖高产菌株。

2.如权利要求1所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，在游动放线菌中强化表达正调控蛋白基因具体包括如下步骤：

S1，设计并构建用于强化表达正调控蛋白基因ACPL_1889的整合型质粒I；

S2，通过接合转移将整合型质粒I导入受体菌株中，然后对突变株进行安普霉素抗性验证，并提取基因组通过PCR产物片段大小的差异，筛选得到基因强化表达突变株。

3.如权利要求2所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，所述整合型质粒I的具体构建方法是，通过PCR扩增的方式分别从游动放线菌SE50/110基因组中获取228 bp的ACPL_1889基因片段以及pDR3质粒中获取126 bp的强启动子kasOp*基因片段，在质粒pSET152的XbaI/BamHI位点插入126 bp的 kasOp* 基因片段和228 bp的ACPL_1889基因片段。

4.如权利要求2所述的提高阿卡波糖发酵水平的方法，其特征在于，所述阿卡波糖高产菌株的发酵包含下列步骤：将基因强化表达突变株在固体培养基上活化，然后将活化后的菌丝体接种在一级种子培养基中于28°C~30°C、180~220 rpm的转速下培养30~36小时；按照10%~15%的接种量转接至二级种子培养基中于28°C~30°C、180~220 rpm的转速下培养24~28小时；按照10%~15%的接种量转接至发酵培养基中于28°C~30°C、180~220 rpm的转速下培养90~96小时后收取发酵液。