[发明专利]利用复合微藻发酵山桐子废液制备山桐子棕榈烯酸的方法

说明书

本发明提供了一种利用复合微藻发酵山桐子废液制备山桐子棕榈烯酸的方法，解决了现有技术中棕榈烯酸来源受到限制，难以满足市场的需求的技术问题。它包括下述步骤：（1）以山桐子废液制备发酵用培养液；（2）复合微藻发酵；（3）破壁萃取；（4）油脂分离纯化，得到山桐子棕榈烯酸和山桐子二十二碳六烯酸。本发明利用高产油的绿球微藻为出发菌，以山桐子废液制备利于绿球微藻菌生长的培养液，通过自养、异样结合发酵，将培养后的菌体干燥提取后进行分离纯化得到高纯度的山桐子棕榈烯酸和山桐子二十二碳六烯酸，弥补了棕榈烯酸产量的不足，扩大了棕榈烯酸的来源，能更好的满足市场的需求。

技术领域

本发明涉及一种利用复合微藻发酵山桐子废液制备山桐子棕榈烯酸的方法。

背景技术

近年来，由于棕榈烯酸（palmitoleic acid）在一些慢性疾病如代谢综合症、糖尿病和炎症中具有治疗作用，已经引起人们广泛关注。棕榈烯酸是一种16碳的单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid, MUFA,双键位于碳端的第7个碳原子上(16:1n-7)(21它的密度为0.905(g/mL，25/4℃)，熔点为0.5～1℃。棕榈烯酸难溶于水，易溶于碱溶液和乙醚、氯仿、正己烷、乙酸乙酯等有机溶液，在常温下为无色透明液体。

目前，棕榈烯酸主要来源于深海鱼等。但由于国际上禁捕鲸鱼和渔业资源匮乏，棕榈烯酸来源受到限制，难以满足市场的需求，因此对其原料的开发和功能特性进行研究将会产生良好的经济价值和社会效益。

棕榈烯酸的分子式为CH₃（CH₂）₅CH=CH（CH₂）₇COOH，棕榈烯酸在大多数动植物种均有分布，但含量较高的物种稀少。山桐子棕榈烯酸在一般油料作物中含量较少，但在一些特殊植物中也有很高的含量，因此寻找植物性来源并加以提取可以较好的弥补棕榈烯酸产量的不足。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用复合微藻发酵山桐子废液制备山桐子棕榈烯酸的方法，以解决现有技术中的棕榈烯酸来源受到限制，难以满足市场的需求的技术问题。本发明提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。

为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供的一种利用复合微藻发酵山桐子废液制备山桐子棕榈烯酸的方法，包括下述步骤：

（1）以山桐子废液制备发酵用培养液

向山桐子废液中加入KH₂PO₄ 、MgSO₄‧7H₂O、CaCO₃、Na₂SO₄ 、FeSO₄‧7H₂O 、吲哚丁酸（IBA）、葡萄糖、麦芽糖、牛肉浸膏和氨基酸，得到发酵用培养液；

（2）复合微藻发酵

以裂殖壶菌和绿球微藻菌在步骤（1）得到的培养液中协同自养异样结合发酵，得到发酵后的菌体；

（3）破壁萃取

将步骤（2）得到的发酵后的菌体依次经过离心脱水、浓缩、干燥、破壁和有机溶剂萃取方式提取，得到山桐子油脂肪酸乙酯；

（4）油脂分离纯化

将得到的山桐子油脂肪酸乙酯通过尿素包埋、分子蒸馏分离纯化得到山桐子棕榈烯酸和山桐子二十二碳六烯酸。

进一步的，所述步骤（1）中，所述山桐子废液的制备是以山桐子鲜果为原料，经液压压榨后得到液态料和固体料，将得到的液态料经一次离心除杂、酶解脱胶、二次离心脱水得到山桐子初榨油和山桐子废液。