[发明专利]连续规模化生产重组胶原蛋白的工艺

说明书

本发明公开了一种连续规模化生产重组胶原蛋白的工艺。所述工艺先将毕赤酵母发酵液离心分离后，收集上清液，加酸调节pH至3～4，然后经过陶瓷膜过滤去除杂质，纳滤膜浓缩脱酸至pH为5.5±0.5，得到高纯度的重组胶原蛋白溶液，再通过喷雾干燥的方式得到重组胶原蛋白。本发明工艺简单，通过低温喷雾干燥的方式得到的重组胶原蛋白纯度可达94.21％，并可实现连续规模化生产。

技术领域

本发明属于生物制品生产技术领域，涉及一种连续规模化生产重组胶原蛋白的工艺。

背景技术

胶原蛋白是动物体内含量最丰富的一类蛋白质家族，作为天然的生物材料，在食品、化妆品、医疗领域中有着广泛的应用。但是这些胶原蛋白大都来自动物如猪、牛、鱼等动物皮肤、骨骼等组织，主要通过酸、碱、加热等物理化学方法处理得到，原料成分复杂，批差异性大，存在病毒隐患，生产过程中产生大量的酸碱性废水，对环境污染严重，并且动物与人体的异源性导致需要增加去除免疫原性，限制了胶原蛋白在医药方面的进一步应用。

随着现代DNA重组技术的发展，各种宿主细胞被选为基因工程菌用于构建表达胶原蛋白，解决了动物源胶原蛋白存在的缺点。在医疗领域，重组胶原蛋白表达纯化后，主要通过真空冷冻干燥的方法获得固体状的重组胶原蛋白。真空冷冻干燥在低温下进行，对于许多热敏性物质例如蛋白质、微生物等特别适用，低温条件下能够保持物质的物理化学性能，使其不会发生变性或失去生物活性。但是对于应用在食品和化妆品方面的重组胶原蛋白，真空冷冻干燥方法存在着能耗高且产量不足的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种连续规模化生产重组胶原蛋白的工艺。该工艺采取低温喷雾干燥和冷风收料装置，最大限度的保持重组胶原蛋白的纯度和生物活力。

实现本发明目的的技术方案如下：

连续规模化生产重组胶原蛋白的工艺，具体步骤如下：将表达重组胶原蛋白的毕赤酵母发酵液离心分离后，收集上清液，加酸调节pH至3～4，然后经过陶瓷膜过滤去除杂质，纳滤膜浓缩脱酸至pH为5.5±0.5，得到重组胶原蛋白溶液，将重组胶原蛋白溶液除菌过滤后，通过低温喷雾干燥和冷风收料装置得到固体形式的重组胶原蛋白。

本发明所述的表达重组胶原蛋白的毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris，已于2011年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5021，并在中国专利201110327865.5中充分公开。

优选的，陶瓷膜的孔径为100nm，纳滤膜的截留分子量为5KD。

优选的，喷雾干燥进风温度为120～130℃，更优选为125℃。

优选的，喷雾干燥出风温度为70～80℃，更优选为75℃。

优选的，通过冷风收料装置后，物料温度25～35℃，更优选为25℃。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

与真空冷冻生产工艺相比较，本发明采用低温喷雾，进风温度控制在120～130℃，同时采用冷风收料装置，使干燥好的蛋白物料处于25～35℃环境中，最大限度的保持重组胶原蛋白的纯度和生物活力。同时喷雾干燥可以实现连续大规模生产，降低生产成本，扩大了重组胶原蛋白的应用范围。

具体实施方式

在本发明的具体实施例中，采用的菌株为表达重组胶原蛋白的毕赤酵母，为巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris，保藏编号为CGMCC NO.5021，保藏日期为2011年6月29日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，已在中国专利201110327865.5中充分公开。

下面结合具体实施例对本发明做进一步详述。

实施例1